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选修一 生物技术实践 专题一 微生物的利用 议一议:高温灭菌的原理是什么? 答案:高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活,从而达到灭菌的目的。 答案: 温和 有害的微生物 芽孢 孢子 煮沸消毒法 巴氏消毒法 所有的微生物 灼烧 干热 高压蒸汽 答案: 接种环、涂布器 平板划线 稀释涂布平板 酒精灯火焰 查一查:什么是菌落?它有什么用途? 答案:菌落是单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同,它可以作为鉴别菌种的重要依据。 答案: 固体斜面 菌落 4℃ 不长 污染 甘油管藏 -20℃ 答案: 选择培养基 尿素 稀释涂布平板法 显微镜直接计数 ×M 被测试的条件 非测试因素 答案: 纤维素 CMC—Na 微生物 倒平板 发酵产纤维素酶 葡萄糖 想一想:什么叫选择培养基? 答案:选择培养基是在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。目的是培养、分离出特定微生物。 看一看:纤维素分解菌筛选的原理是什么? 答案:刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素,从而使菌落周围形成透明圈。 1.微生物的实验室培养 (1)培养基 ①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 ②分类和应用 ③培养基配方及营养要素 基本营养要素:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。 特别提醒:①微生物最常用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 ②对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物既是碳源,又是氮源、能源。 ③有些培养基不需要添加特殊营养物质,生物自己能合成,如大肠杆菌能合成某些维生素,作为特殊营养物质。 ④制备:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 (2)无菌技术 ①消毒和灭菌的区别 特别提醒:用酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果最好,原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。 ②无菌技术主要操作要求 a.实验前应对操作空间、操作人员消毒,对所用器具和培养基灭菌。 b.实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作,另外要避免已灭菌处理材料再次污染。 2.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 ①原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ②方法:平板划线法、稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面;稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 (3)菌种的保藏 ①短期保存:固体斜面培养基上4℃保存,菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存:-20℃甘油管在冷冻箱中保藏。 特别提醒:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的温度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发;又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 1.分析下面培养基的配方:KH2PO4、Na2HpO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答: (1)在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,又是如何进行选择的?________________________________________________。 (3)培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是( ) ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥ C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤ 解析:碳源是提供碳元素的物质,氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖,氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖,但是,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。培养基用高压蒸汽灭菌;培养皿能耐高温,可用干热灭菌;接
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