植物組织培养室参观与设计(3学时).docVIP

实训一 植物组织培养室参观与设计（3学时） 一、目的要求 通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。 二、仪器与用具 1、仪器：超净工作台，空调机，蒸馏水发生器或纯水发生器，高压灭菌锅，低温冰箱、普通冰箱，电炉，显微镜，天平、恒温培养箱，烘箱等设备。 2、用具：各种培养皿，分注器，各种实验器皿和各种器械用具。 三、方法步骤 1、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项。 2、先由指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。 3、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况，包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。 1）准备室（化学实验室） 面积：20m2左右 用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，清洗及整理工作。 要求：明亮、通风 设备：工作台，橱柜，水池，仪器，药品等 2）缓冲室 面积：约3-5m2左右 用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。 设备：1盏紫外灯，1个配电板，石英电力时控器等 3）无菌操作室（无菌室，接种室） 面积：10-20m2，视生产规模和超净工作台数量而定。 用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割，嫩枝扦插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。 要求：干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。门窗要密闭，一般用移动门窗。 设备：超净工作台、空调机，医用小平车，操作台、搁架等。 4）培养室 面积：视培养架多少及培养物数量而定。 用途：将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。 设备： （1）培养架与灯光 培养架数目多少视生产规模而定，年产4万--10万苗需4--6个培养架；年产10万--20万苗约需8—10个培养架。每个培养架一般6层，总高度2m，每0.3m为一层,最下一层距离地面0.2m架宽以0.6m为好，架长以40W日光灯的长度来决定，即约1.26m。每层架子安装2盏日光灯。 （2）通风设备 在稍高处设置进风气窗，在其对侧近天花板处设置排风窗。 （3）边台、空调机、加湿器（除湿器）、各类显微镜、温湿度计。 5）驯化室 面积：视生产规模而定。 用途：组培苗（试管苗）移栽前进行炼苗。 要求：清洁无菌 设备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器。 6）温室 面积：视生产规模而定。 用途：保证试管苗不分季节地常年生产。 设备：温度控制装置、通风口、喷雾装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具及相应药物。 四、作业 1、将本次实训内容整理成实训报告。 2、每人设计一个植物组织培养实验室的组建方案。 实训二 MS培养基的配制与灭菌（3学时） 一、目的要求 通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。 二、仪器与用具 1、仪器：酸度计或pH试纸、电磁搅拌器、电炉 2、用具：高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签 3、试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1 N 、0.5N NaOH，0.1 N 、0.5N HCl 三、方法步骤 （一）MS固体培养基的配制 1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。 2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。 注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。 3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。 如配制1000ml培养基： 需：MS大量元素母液 100ml MS微量元素母液 10ml MS铁盐母液 10ml MS有机物母液 10ml 4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。 5、加入蔗糖（30g/L），溶解。 6、定容：用容量瓶。 7、调pH值：一般pH=5.8。 用0.1 N 和0.5N 的NaOH和HCl 将pH调至所需的数值。 注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。 ②pH值的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬；低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。 ③如果pH值与所需的数值相差很大，可先用0.5N的NaOH或HCl调节，至接近时，再用0.1N的酸、碱调节。以免加入过量的水溶液，导致溶液体积增大，培养基不能很好地凝固（因加入的琼脂量一定）。 8、分装到大三