檢测锌离子的荧光探针.docVIP

检测锌离子的荧光探针 姓名：徐英 学号 专业：应用化学 摘要：锌是人体必需的微量元素之一，是维持机体正常生长发育、新陈代谢的重要物质。锌的过量与不足都会导致人体代谢异常，产生疾病，因此，Zn2+含量的测定在临床、医药、食品、环境监测及科研中都有极其重要的意义。本文简要综述了测定细胞内游离锌离子荧光探针物质的化学规律、性质和优缺点。 关键词：Zn2+、荧光探针、定量检测 1、前言 在自然界元素的丰度顺序中，锌排在第25位，在地壳中的平均含量波动于0.004-0.02%之间。锌是位于元素周期表第II副族的过渡金属元素，具有3d104s2的价电子结构，通常只失去s电子而成+2氧化态。Zn2+的原子半径较小，且因其带两个正电荷，所以它对电子的亲和力很高，是一个强的质子受体[1]。 1940 年Eggleton首先提出人类需要锌[2]。Prasad和Sandstead 等研究明确了锌是人类必需的微量元素[3]。Zn2+是人体内第二富集的过渡金属，广泛分布于人体内部。 据研究表明，锌在许多生理、生化过程中发挥着极为重要的作用，例如:锌离子是组成三百多种生物酶活性催化中心的重要金属离子之一；它可作为金属蛋白酶的结构因子或转录因子；可以和许多调控酶相互作用，作为第二信使触发或阻断诸如细胞凋亡等重要生理过程；具有调控大量离子通道的能力，参与神经传导的过程；同时，锌离子在中枢神经系统（CNS）中还扮演着非常重要的角色。新近研究还表明，锌离子的浓度大小与多种疾病的发生紧密相关[4]。 缺锌对机体有重要影响: 一是对生长发育和组织再生的影响；二是对性器官和性功能的影响；三是锌依赖酶(含锌酶)的活性降低；四是缺锌可使胰岛素降解加剧，， 因此，若能实时跟踪、监测生物体中的锌离子，就有可能使人们在细胞层次或者组织层次上进行锌离子的生理、生化行为的研究。这对揭开生物体系中锌离子与生物体内许多重要生理、生化功能之间的关系之谜具有极其重要的科学价值。 自1987年第一个锌离子荧光探针(TsQ)诞生以来，陆续研制开发了几种锌离子荧光探针，如Zinquin，Zinpyr-l，ACF-l，ACF-2，NewportGreen等。人类利用这种方便快捷的方式检测Zn2+，为研究生物体内Zn2+的功能和性质以及它的结合方式，探索锌在生物体中的作用做出了卓越的贡献[7]。但在测定生物活体内的游离Zn2+的浓度方面仍存在一定的困难。 2、荧光离子探针识别机理及影响因素 在锌离子的荧光检测中，最关键的是荧光选择性配体的设计。目前报道的荧光选择性配体的基本结构可分为:荧光发色团—间质—识别基团三部分(如图1所示) [4]，其设计大多基于光致电荷迁移(PCT)和电子迁移(PET)两种荧光机理。也有将两种机理结合起来设计的荧光配体。但无论基于何种机理，荧光配体中的荧光发色团和识别基团的选择均极为重要。 图1荧光选择性配体及其对离子识别的工作原理示意图 荧光发色团是构成荧光离子探针的最基本单元，其主要功能是实现识别信息到荧光信号的转换。一般说来，一切具有荧光信号的有机基团都可以作为离子探针的荧光发色团。常用的荧光发色团有以萘，蒽和芘等为主要代表的稠环芳烃类；丹酰基团；以荧光素和罗丹明为代表的呫吨类荧光基团；氟硼二吡咯类；香豆素；1，8-萘酰亚胺等荧光基团(如图2所示) [1]。 图2常用的荧光发色团 间质的作用是将荧光发色团和识别基团连接起来，使之成为一个完整的体系。它以多种形式存在，在很多类型的探针中，起到调节的作用。但是，我们应该知道并非所有的探针都具有间质，一些基于分子内电荷转移机理的探针就没有间质存在[8]。识别基团主要功能在于识别和结合客体，识别基团是荧光离子探针设计中的重中之重，他选择决定了探针分子的选择性和效率。 荧光离子探针的识别性能评价主要受选择性、灵敏性、水溶性、实时性和原位检测性能这五种因素的影响[1]。 选择性主要是指探针分子和识别目标的作用区别于其它因素的情况；灵敏度主要是指探针分子对检测产物的最低检测程度，是灵敏性的表现形式；水溶性是探针分子应用价值的重要基础；实时性主要是指探针分子对检测物的响应速度。响应速度越快说明探针分子的实用性越高，越有利于在实际生活和生产之中应用；原位检测性能则取决于探针分子同被检测体系之间的相容性。相容性越好，则原位检测性能越好。其实在一定限度内，仪器对荧光探针检测的空间分辨率有着重要影响。 3、锌离子荧光探针作用机理 人们先后研究和建立了多种方法用以检测锌离子，如分光光度法，荧光探针法，电离质谱法和核磁共振法等。但是，生物体中的锌大多以络合形式存在分子内和分子间的游离Zn2 + 的浓度很低。近年来，人们已经了解到Zn2 + 的几种传输器的结构、功能以及它的传输形式，但Zn2 + 的吸收、传输、分配及其