氧化亞铁硫杆菌.docVIP

摘要 的一组蛋白质，改变了它们的合成水平嗜酸生长期间亚铁硫杆菌ATCC 19859于金属硫化物，硫代硫酸盐，元素硫，和二价铁的特点是使用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳。 N-端氨基酸测序和这些蛋白的质谱分析允许他们的身份和在A的现有基因组序列中的相应基因的定位ATCC亚铁硫杆菌23270 。各地的一些这些基因的基因组上下文暗示他们在能量代谢参与A.氧化亚铁硫杆菌的。两组蛋白质可以区分开来。第一种由蛋白质高度上调了增长的硫化合物（以及对亚铁增长下调）的：一个44 kDa的外膜蛋白，远销21 - kDa的假定硫代硫转移酶蛋白，一个33 kDa的假定硫代硫酸盐/硫酸结合蛋白质， 45 kDa的推定的荚膜多糖输出蛋白，和功能未知的推测的16 -kDa蛋白。蛋白质的第二组包括那些在硫下调了增长（以及对亚铁增长上调） ： rusticyanin ，细胞色素C552 ，一个假定的磷酸盐结合蛋白（ PST文件） ，核酮糖二磷酸羧化酶的小亚基与大亚基和30 - kDa的推定CbbQ蛋白，等等。结果表明，一般的铁和硫利用率途径的分离。 Rusticyanin ，除了被高度表达于二价铁，也被新合成的，如通过代谢标记来确定，尽管在较低的水平，对硫的化合物和不含铁的金属硫化物生长过程。在含有铁，如黄铁矿和黄铜矿金属硫化物生长，合成上调上亚铁和那些上调对硫化合物两种蛋白，这表明两种能量产生途径被同时感应取决于可氧化的底物中可用的种类和浓度氧化亚铁硫杆菌（原氧化亚铁硫杆菌）是一种化能自养细菌，从二价铁，元素硫，或部分氧化的硫化合物（6 ，16， 26 ，30， 41）的氧化得到它的能量。这和目前在其栖息地溶解金属硫化物等微生物的能力在biomining操作成功应用（ 30 ， 41 ） 。元素硫的由A.杆菌等微生物的需氧氧化反应是通过一个硫双加氧酶（31 ， 36-38 ） 。硫代硫酸钠已被假定为在黄铁矿（34）的硫部分的氧化的关键化合物。含有该氧化反应的所有已显示发生化学（32， 33）。然而，硫化合物氧化酶，如A.氧化亚铁硫杆菌，氧化硫硫杆菌A. ，或Acidiphilium acidiphilum的连四硫酸盐水解酶也可参与该过程（9 ，11，12 ，22， 39）。此外，酶A.杆菌或A.硫杆菌的硫代硫酸盐或亚硫酸盐的氧化可成功地与铁（III）离子作为氧化剂（34）的化学反应进行竞争。一硫氰酸酶的活性已为A.氧化亚铁硫杆菌（ 40 ）如前所述。这种酶是一种硫代硫转移酶（ TST）打破了二硫键存在于硫代硫酸盐，生成硫和亚硫酸盐。其它酶也参与硫代机制，如A.氧化亚铁硫杆菌（36）的硫代硫酸盐氧化酶。 Ramirez等人。最近描述的导出TST-样蛋白A中氧化亚铁硫杆菌，是高度表达的，当细菌生长在黄铁矿和硫，但是不能以二价铁（29） ，并且其可能参与硫代谢。 进一步研究了一些涉及的硫和金属硫化物的氧化的成分，我们分析了通过表达蛋白质组学由细菌合成的蛋白质的子集上生长时的Fe （II）离子，S0，硫代硫酸盐，黄铁矿，黄铜矿，或铁免费金属硫化物。我们的研究结果表明，合成与硫代谢的几种蛋白质，其中包括氧化和收购，被诱导（或去阻遏）时，微生物就减少无机硫的形式增长的。由二价铁的微生物的生长，大多数这些蛋白质的表达下调，而二价铁氧化途径的蛋白质大大诱导，配套的铁和硫氧化途径依赖于衬底被氧化单独调节的存在。 .嗜酸氧化亚铁硫杆菌菌株ATCC 19859 生长在先前介绍的被修饰过的包含亚铁离子的9K培养基中，生长在硫元素中是通过利用硫粉来实施的，黄铁矿（40%的铁，被发现能够穿过75微米孔径的筛子）和黄铜矿的浓缩物是Paul NOrries很友好的送给我们的，Zns和Cus购买自Aldrich，并且相应的分别包含28ppm和125ppm的微量铁，细胞在这些底物中的生长是通过在修饰过的9K培养基中进行的，其中亚铁被相应的硫化物所代替，嗜酸氧化亚铁硫杆菌生长在硫代硫酸盐中是通过DSMZ来实施的，培养基71包含20微升的硫代硫酸盐和接下来的混合物（G/L：KH2PO4，3.0，MgSO4.7H2O，0.5，硫酸铵，3.0： 2水合氯化钙，0.25，通过添加1M的NaOH使PH保持在4.6，为了放射性标记全细胞蛋白，洗脱过的细胞再悬浮在10毫升的相应培养基中，然后添加0.1mCi(比活，1087Ci/mmol)的含硫35的蛋氨酸，细胞最后培育在含有或不含添加物的同样生长环境中30到40个小时。 二维的非平衡PH梯度电泳，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，和射线自显迹法。全细胞蛋白质是通过二维的非平衡PH梯度电泳来分离的，就像先前描述的嗜酸氧化亚铁硫杆菌，通过使用来自于伯乐公司的两性电解质（PH为3到10），来操作实施，细胞样品（4mg[湿重]未被标记的细胞，或者是通过让细胞生长在含[35S