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生化需氧量的测定 实验目的 本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。通过本实验，希望达到以下目的： 了解生化需氧量的相关理论与其实际意义。 掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。 掌握通过BOD5计算其它时间BOD的方法。 实验原理 生化需氧量是指在一定条件下，好氧微生物分解水中的可氧化物质，特别是有机物的生物化学过程所消耗溶解氧的量，用BOD表示。水中存在的硫化物、亚铁等还原性物质也会消耗部分溶解氧，但通常它们的含量比较低，因此BOD可以间接表示水中有机物质的含量。对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度，保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量（CODCr）推算，对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。测定BOD的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解罚、库仑滴定法、测压法等。 稀释接种法，又称为五日培养法（BOD5法），即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示。 实验装置与仪器 实验仪器 恒温培养箱，数量×1 5～10L细口玻璃瓶 1000～2000mL量筒 玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板 200～300mL溶解氧瓶：带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口 供分取水样和添加稀释水用的虹吸管 实验所需试剂 磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、2.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠（Na2HPO4?7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000mL。此溶液的pH应为7.2。 硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁（MgSO4?7H2O）溶于水中，稀释至1000mL。 氯化钙溶液：将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。 氯化铁溶液：将0．25g氯化铁（FeCl3?6H2O）溶于水，稀释至1 000mL。 盐酸溶液（0．5mol?L-1）：将40mL（ρ=1．18g?mL-1）盐酸溶于水，稀释至1000mL。 氢氧化钠溶液（0．5 mol?L-1）：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。 亚硫酸钠溶液（c1/2Na2SO3=0．025 mol?L-1）：将1﹒575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。此溶液不稳定，需每天配制。 葡萄糖—谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸（HOOC—CH2—CH2—CHNH2—COOH）在103℃干燥1h后，各称取150mg溶于水中，移入1000mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。 稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8mg?L-1左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。稀释水的pH值为7.2，其BOD5应小于0.2 mg?L-1。 接种液：可选以下任一方法获得适用的接种液。 城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清溶液供用。 用含城市污水的河水或湖水、污水处理厂的出水。 当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样做为废水的驯化接种液。如无此水源，可取中或经适当稀释或的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3～8天。 接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液为20～30mL；河、湖水为10～100mL。接种稀释水的pH值应为7.2，BOD5值以在0.3～1.0mg?L-1之间为宜。接种稀释水配制后应立即使用。 实验步骤 水样的预处理： 水样的pH若超出6.5～7.5范围时,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调pH值近7，但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。 水样中含有铜、铅、锌、