血红蛋白的提取和分离ppt解析.pptVIP

血红蛋白的提取和分离 自学提纲： 2. 缓冲溶液： 3.电泳： 实验操作： 注意事项： * * 主要概念：凝胶色谱法 电泳法 缓冲溶液 它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用 2.主要原理：凝胶色谱法分离蛋白质的原理 电泳法分离样品的原理 缓冲溶液的组成和作用机理 据自学提纲阅读课本66-68页 1. 凝胶色谱法（分配色谱法） 根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 2.分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱柱的时候，怎样分离？ 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动较快，从而分离。 概念：凡是能够抵御外加少量强酸或者强碱的影响使原来溶液pH基本保持不变的混合溶液。 弱酸和弱酸盐： H2CO3—NaHCO3 CH3COOH——CH3COONa 弱碱和弱碱盐：NH4OH—NH4CI 概念：是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 原理：样品中各种分子带电性质、分子大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度， 常用的电泳方法： 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 阅读课本P 67-69，思考下列问题： 1.蛋白质提取和分离的四个步骤分别体现在那些实验操作中？ 2. 血红蛋白有何特点？这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？ 3.如何判断血红蛋白分离是否成功？ 4.填装凝胶色谱柱为什么要紧密不能有气泡？ 【Ⅰ样品的处理、Ⅱ粗分离、Ⅲ纯化、Ⅳ纯度鉴定】 Ⅰ 1.红细胞洗涤：（目的、低速短时离心、重复洗涤） Ⅰ 2.血红蛋白的释放：（蒸馏水、甲苯作用） Ⅰ 3.分离血红蛋白溶液：（分四层） Ⅱ 4.透析：（目的） Ⅲ 5.凝胶色谱操作：（制作、填装、样品的加入洗脱） Ⅳ 6.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳：（测定纯度） 若血红蛋白红色区域均匀、狭窄、平整，则分离成功；若血红蛋白红色区域歪曲、散乱、变宽，则不成功。 因含有血色素而呈红色，在样品洗脱时，可通过颜色来判断什么时候收集洗脱液。使操作变得直观、简化了操作步骤。 若填装不紧密、不均匀，有气泡，会形成无效空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 1.红细胞洗涤次数不能过少； 2.离心速度不能过高和时间不能过长； 3.填装凝胶色谱柱不能有气泡，要紧密。 *