4.DNA酶切.pptVIP

DNA限制性内切酶消化酶切 DNA restriction enzyme digestion 实验原理 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。 Ⅱ类限制性内切酶 Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割, 产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ: 5‘-CCC↓GGG-3’)；有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性末端，如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。 5…G↓AATTC…3 →5… G AATTC…3 3…CTTAA↑G …5 →3… CTTAA G…5 实验材料和试剂 实验材料： λDNA：购买或自行提取纯化。 重组pBS质粒或pUC19质粒。 实验试剂： EcoR I酶及其酶切缓冲液：购买成品。 Hind Ⅲ酶及其酶切缓冲液：购买成品。 琼脂糖(Agarose)：进口或国产的电泳用琼脂糖均可。 实验仪器 对质粒DNA酶切反应 限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶, 消化1-2h。但要完全酶解则必须增加酶的用量，一般增加2-3倍，甚至更多，反应时间也要适当延长。 电泳检测示例 实验注意事项 限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶，消化1-2h。但要