生物分離复习总结.docVIP

第一章 绪论 1、生物分离技术概念 生物分离技术是指从动、植物细胞、微生物代谢产物和酶反应产物等生物物料中分离、纯化目的组份的技术。 是由一系列分离纯化单元操作技术组成。包括：制备型和分析型两类生物分离技术。 2、生物分离一般工艺流程及四个阶段 1). 生物料液预处理、固液分离及细胞破碎—预处理：加热、调pH、沉淀、絮凝、凝聚;固液分离：离心、过滤;细胞破碎：均质、酶解、超声波等. 2).初步纯化（提取）——浸提和萃取、浓缩、分子蒸馏、沉淀、膜分离、层析等 3). 高度纯化（精制）——层析、结晶、干燥等 4). 最后纯化——再次高度纯化或HPLC法纯化 3、生物分离所用原材料特性及生物分离过程特点 1）：所用原材料特性组成复杂：目的物质浓度很低；容易腐败变质；待分离物质通常不稳定；不同批次间物料组成和特性不尽相同；要求有毒有害成分残留达到允许的范围内 2）：生物分离过程特点:a工艺常由好几步分离操作组成，不易获得高收;b工艺的选择和操作要注意保持目的组份的生物活性;c工艺条件要有一定弹性; d对基因工程产品，应注意生物安全性 第二章 生物材料的与处理技术 对料液进行分离纯化，在进行固液分离之前，必须进行预处理。 固液分离处理——过滤、离心 料液存在大量杂质，会导致以下问题：如料液粘度过大、产生膜污染、高价无机离子和杂蛋白降低离子交换的吸附能力、萃取时乳化严重等等 预处理的目的： 除去部分杂质；改变料液的物理性质（pH、黏度等）——使后续分离纯化工序顺利进行 料液中的胶体性质：预处理应破坏料液的胶体的稳定性。 胶体：粒度（0.1um－1um），丁达尔现象 生物料液中的胶体粒子：大分子DNA，蛋白质，细胞，细胞碎片等 胶体稳定性条件：双电层（以及带同种电荷）；水化层 一、 凝聚和絮凝技术 （一）凝聚技术：原理：中性盐作用下，中和胶体粒子表面电荷和脱去其水化层而使胶体粒子沉淀。 中和电荷：一般，菌体或细胞带负电荷，其周围吸附正电荷，加入中性盐后，阳离子会中和负电荷，减少了胶体间斥力，胶体粒子由于热运动碰撞而聚集沉淀。 去水化：中性盐离子的水化作用而破坏胶体粒子的水化层，使胶体粒子能相互碰撞而凝聚沉淀。 常用的凝聚剂 金属离子凝聚能力比较：Al 3+ Fe 3+ H + Ca 2+ Mg 2+ K + Na + Li + 常用的凝聚剂中性盐：Al2(SO4)3·18H2O（明矾净水原理）；AlCl3.6H2O、FeCl3 、ZnSO4 、MgCO3 凝聚法缺点：得到的凝聚颗粒比较小，分离仍较困难。；絮凝法可克服这一困难。 （二）絮凝技术 1：原理：在高分子絮凝剂的作用下，通过架桥作用，使细胞和蛋白质聚集成粗大的絮凝团而沉淀。 高分子聚合物絮凝剂，是长链线状、水溶性的聚合物 在长的链节上含有相当多的活性功能团—可以带有多价电荷（如阴离子或阳离子），也可以不带电性（如非离子型）。 通过静电引力、范德华分子引力或氢键作用，强烈地吸附在胶粒的表面 2絮凝效果的影响因素 A.絮凝剂的相对分子质量：结合考虑架桥效果及水溶性 B.絮凝剂的用量;C.料液的pH值;D.搅拌速度和时间：变速搅拌 3常用的絮凝剂 A,人工合成高分子聚合物 聚丙烯酰胺类：用量少（10-6级）、絮凝体粗大、效果好，速度快，种类多，适用范围广。 聚乙烯亚胺衍生物类;聚丙烯酸类阴离子絮凝剂和聚苯乙烯类衍生物。 无机高分子聚合物絮凝剂：聚合铜盐，聚合铁盐。 B,天然有机高分子絮凝剂:壳聚糖，葡聚糖，明胶， 海藻酸钠等 C.微生物絮凝剂: 主要为糖蛋白、黏多糖、纤维素及核酸等高分子物质。安全，无毒，不污染环境。 二、 其他预处理方法 1.杂蛋白去除方法： 等电点沉淀法（常需结合它法） 变性沉淀法：加热变性、大幅度改变pH、加有机溶剂、加表面活性剂等 吸附法：与高价盐形成胶态沉淀 加沉淀剂法：能与蛋白质形成复合沉淀的化学试剂 2.高价无机离子去除方法：离子交换法;沉淀法：加入阴离子盐形成不溶性盐沉淀，如Ca 2+ 加草酸，Mg 2+ 磷酸盐，Fe 3+ 加黄血盐 3.杂质多糖的去除方法：酶解法 4.杂质DNA的去除法：核酸酶水解;超声波破碎;离子交换层析或亲和层析 （三）．应用实例：发酵液的预处理 一、降低发酵液黏度—加热法：将发酵液温度升高到80℃，保温即可将其黏度降低数十甚至数百倍 二、凝聚沉降分离悬浮物—凝聚剂法：如明矾凝聚法（测产品澄清液浊度） 三、絮凝法沉降分离悬浮物—絮凝剂法：如壳聚糖絮凝法（测产品澄清液浊度） 第三章 固液分离技术 固液分离——固相、液相分离:单元操作是过滤与离心 一、过滤：（原理）以多孔性物质作为过滤介质，在外力（重力、真空度、压力或离心力等）作用下，流体（液体、气体）及小颗粒固