亚砷酸钠对人胃癌细胞株bgc823的作用机制.docVIP

亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC823的作用机制 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：赵文韬， 王严庆， 汤为学 【摘要】nbsp; 目的 探讨亚砷酸钠对人胃癌细胞株BGC823的作用机制。方法 采用MTT法、光镜、电镜、流式细胞仪检测和免疫细胞化学法研究亚砷酸钠对BGC823细胞生物学行为的影响。结果 不同浓度的亚砷酸钠均可有效抑制BGC823细胞生长，且具有浓度和时间依赖性，其中效浓度为4.86μmol/L。流式细胞仪检测发现亚砷酸钠作用不同时间后，细胞均出现G2/M期阻滞。形态学观察显示亚砷酸钠作用72h后，细胞出现典型的凋亡和坏死形态学改变。免疫细胞化学法发现亚砷酸钠能显著上调细胞Caspase3蛋白的表达。结论 亚砷酸钠对BGC823细胞的生长有明显的抑制作用，并可诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡和坏死，其机制可能与其抑制ROS的清除，上调Caspase3蛋白的表达有关。 【关键词】nbsp; 亚砷酸钠；胃肿瘤；凋亡；Caspase3 nbsp;nbsp;nbsp; Antitumor Mechanism of Sodium Arsenic on Human Gastric Carcinoma Cell Line BGC823 in Vitro nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; Key words：Sodium arsenic；Stomach neoplasms； Apoptosis；Caspase3 nbsp;nbsp;nbsp; 近年来我国学者应用三氧化二砷(As2O3)作为抗肿瘤药物临床治疗急性早幼粒细胞白血病，得到了满意的疗效，表现出完全缓解率高，副作用小、无骨髓抑制等特点[1]。本实验以体外培养的人胃癌细胞株BGC823为研究对象，观察亚砷酸钠对BGC823细胞的生物学行为的影响，探讨其作用机制，以期为亚砷酸钠可能的临床应用提供实验依据。 nbsp;nbsp;nbsp; 1材料和方法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.1材料 nbsp;nbsp;nbsp; 人胃癌细胞株BGC823为低分化腺癌细胞株，由重庆医科大学病理生理教研室提供。亚砷酸钠注射液(10ml:10mg(As2O3)及90mg氯化钠)购于哈尔滨伊达药业有限公司（生产批号：011230）； RPMI1640购自HyClone公司；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、RNA酶（RNase）、碘化丙啶（PI）购自Sigma公司；鼠抗人Caspase3单克隆抗体为Santa Cruz公司产品。流式细胞仪（型号：FACScan ）为美国BD公司产品；透射电子显微镜为日本Hitachi公司产品。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2细胞培养 nbsp;nbsp;nbsp; 人胃癌细胞株BGC823用含10%小牛血清的RPMI1640培养液，于37℃，5%CO2培养箱中培养。实验时选用对数生长期细胞。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.3MTT法检测 nbsp;nbsp;nbsp; 将BGC823细胞密度调整为5.0×104/ml，接种于96孔培养板中，每孔200μl。实验设空白对照组、细胞对照组和实验组。实验组加亚砷酸钠，浓度分别为2.50、5.00、10.00、20.00、40.00μmol/L。空白对照加培养液，不加细胞。每组5个复孔。分别培养24h、48h、72h后，吸去培养液，每孔加入无血清的培养液200μl和MTT（50mg/ml）20μl,继续培养4h后，吸去培养液，每孔加入二甲基亚砜200μl，用酶标仪测定570mm波长处吸光度（A）值。每组实验重复3次，取均值。参照文献[2]计算细胞抑制率。细胞抑制率（％）＝（1-实验组A值/细胞对照组A值）×100％，用直线回归法测定中效浓度IC50值。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.4细胞周期分析 nbsp;nbsp;nbsp; 细胞以5.0×104/ml接种于100ml培养瓶中。加入2.50μmol/L的亚砷酸钠，分别培养24h、48h、72h后收集细胞，PBS洗涤3次，70%冰乙醇固定， PBS洗涤3次，加入20μg/ml的RNase 200μl于37℃水浴30min，加入20μg/ml碘化丙啶（PI）1ml于4℃染色30min。上机用Modifit LT2.0软件分析细胞周期分布。实验重复3次。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.5细胞形态观察 nbsp;nbsp;nbsp; 光镜观察：细胞以5.0×104/ml接种于预置盖玻片的24孔板中，每孔2ml。加入