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何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：熊平源 王强 郭凯文 唐朝晖 白惠卿 【摘要】nbsp; 目的：了解何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响。方法：采用溶血素测定法检测何首乌对老龄大鼠溶血素抗体产生的影响；参照LDH法检测何首乌对老龄大鼠NK细胞活性的影响；采用 3HTdR掺入法检测何首乌对老龄大鼠淋巴细胞增殖活性的影响；采用姬姆萨染色法检测老龄大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果：药物实验组与老龄对照组比较，溶血素抗体产生水平明显增加(Plt;0.01)；NK细胞的细胞毒活性明显增强(Plt;0.01)；T、B淋巴细胞的转化增殖活性增强（Plt;0.05；Plt;0.01）；腹腔巨噬细胞吞噬功能也明显增强。结论：何首乌能增强老龄大鼠的免疫功能。 【关键词】nbsp; 何首乌； 溶血素抗体； NK细胞； 淋巴细胞； 腹腔巨噬细胞 　　现代医学认为，何首乌（Tuber Fleeceflower Root）具有延缓衰老、降低血脂、保护肝脏及抗菌消炎等作用。有文献报道，何首乌可延缓胸腺退化、萎缩，并增加胸腺重量。何首乌不仅可增强小鼠T、B淋巴细胞对非特异性有丝分裂原的反应性，而且可增强小鼠对抗原的特异性细胞免疫及体液免疫应答，具有免疫增强作用［1］。本研究就何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响进行了研究。 　　1nbsp; 材料 　　11nbsp; 动物分组 27月龄清洁级雄性SD老年大鼠45只,由武汉科技大学医学院实验动物中心提供，随机分为青年对照组(YC)、老年对照组（OM）、老年实验组，每组15只。实验组给予何首乌水提物灌胃，YC组和OM组给予蒸馏水灌胃，灌胃时间为连续3个月［2］。 　　12nbsp; 主要仪器Ls5801型液体闪烁计数器，美国Backman公司产品；DG3022型酶联免疫测定仪，华东电子管厂产品；CO2培养箱，美国NaP Co.产品；DYQIII型微量多头细胞收集器，绍兴医疗器械厂产品。 　　2nbsp; 方法与结果 　　21nbsp; 何首乌对老龄大鼠体液免疫功能的影响 采用溶血素测定法［3］。取2×108个/mL绵羊红细胞，按每只鼠0.5mL腹腔注射,免疫4d后,将小鼠处死,摘除小鼠眼球,将每只小鼠血分别滴至小试管内,室温放置1h,使血清充分渗出后离心,上层血清用生理盐水稀释后取1mL,再加入0.5mL绵羊红细胞，置冰浴中冷却，加入1mL补体,离心，取上清液1mL及3mL都氏度剂,震荡均匀，放置10min，于540nm波长下比色，测定样品及绵羊红细胞半数溶血时的OD540值。结果见图1。 　　图1nbsp; 何首乌对老龄大鼠溶血素抗体的影响（略） nbsp;nbsp;nbsp; 　　图1结果显示，老年对照（OM）组与青年对照 (YC) 组比较，抗体产生水平明显低下(Plt;0.05)；而药物实验组与老龄对照组比较, 则抗体产生水平明显增加(Plt;0.01)。 　　22nbsp; NK细胞活性测定参照LDH法，取脾细胞悬液（2×107/mL）0.25mL作为效应细胞,加入YAC1靶细胞悬液（2×106/mL）0.05 mL于96孔培养板中，,使效靶比为50∶1。同时设效应细胞和靶细胞对照, 每份样品设3个复孔,置37℃ 5%CO2培养箱中培养6h。加入　3HTdR 0.5μCi/孔，培养6h后收获，置于液体闪烁仪中测cpm值［4，5］。结果见图2。 　　图2nbsp; 何首乌对老龄大鼠NK细胞活性的影响（略） 　　图2结果显示，老年对照（OM）组与青年对照 (YC) 组比较，NK细胞活性明显低下(Plt;0.05)；而药物实验组与老龄对照组比较, 则NK细胞活性明显增强(Plt;0.01)。 　　23nbsp; 何首乌对老龄大鼠脾细胞增殖的影响无菌取大鼠脾细胞,洗涤两次,用含10%小牛血清的IMDM培养液调细胞浓度至5×106/mL,加入96孔培养板每孔100μL。然后分别加入ConA和LPS 100μL（每份样品设3个复孔），置CO2孵箱培养68h，培养结束前8h掺入3HTdR2.85μBq/孔,收获细胞,测定闪烁值［6］。 　　图3nbsp; 何首乌对老龄大鼠脾细胞增殖活性的影响（略） 　　图3结果显示, 何首乌能增加老龄大鼠脾细胞对ConA和LPS的增殖活性,说明何首乌对老年大鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的转化增殖有促进作用。其中药物实验组对ConA的增殖活性，与老年对照组比较Plt;0.01；而药物实验组对LPS的增殖活性，与老年