第七病理制片.ppt

一、石蜡切片法1、切片前的准备工作石蜡切片是以石蜡作为组织的支持媒介作用。应先将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，组织四周留2mm的石蜡边。 在常规实验室中须备以下用品⑴ 经过清洁液浸泡过的载玻片。⑵ 展片盆、染色架、蛋白甘油。⑶ 大、中号毛笔、眼科镊（弯） 2、切片制作过程⑴ 将预先冷却的组织装在切片机固定器上。⑵ 切片组织经过粗切，待组织充分切完整，右手旋动切片机把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，再用眼科镊轻摄蜡片，以正面放入展片盆中，待摊平整后捞片。⑶ 捞片在载玻片上的二分之一以处。⑷ 切片附贴后，放在空气中稍凉干，即可进行烤片。 3、切片的注意事项⑴ 凡是陈旧、腐败或干枯的组织不易制好切片。⑵ 固定失时或固定不当的组织，染色时常出现核质着色较浅、轮廓不清，出现不等的片状发白区。⑶ 组织脱水，透明和浸蜡过渡，会造成过硬、变脆，特别是动物组织应严格控制。 ⑷ 切片出现横皱纹常多见于组织固定不牢，或切片刀固定不紧。⑸ 切片刀不锋利，切片时会自行卷起或皱起，更不能顺利地将切片联结成蜡带。切片刀如有缺口存在，更易造成切片断裂、破碎、不完整等现象。⑹ 组织切片机各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动，以致切片厚薄不均。 (7)对小标本的蜡块进行粗切时，设置的厚度不能过大，以免将主要病变部位甚至整个组织块修切掉。 (8)摇动旋转轮的转动速度不可过快，用力应均匀，平稳，以40～60r/min为宜。若遇硬化过度的组织以及肝、脑、脾等，动作尤应轻柔，避免产生震动而使切片出现碎裂现象。 (9)在切片过程中，由于切片刀与蜡块相互摩擦会产生热量，导致蜡块温度升高(在夏季尤甚)，往往造成切片困难。可用冰块涂抹切片刀和蜡块切面，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。 (10)展片温度一般为42～48℃，烤片温度一般60～70℃左右。并应及时清除水中的蜡屑等杂物，防止污染切片。  二、冰冻切片法 冰冻切片在组织学技术中应用范围较广，对病理学中的临床手术的快速诊断其意义更大。 冰冻切片多用于新鲜组织，甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。 ? 三、快速石蜡切片切片脱蜡目的要求： 彻底脱去切片组织中的石腊，才能使组织细胞着色，否则成云雾状，会防碍染色细胞结构模糊不清，无法诊断，脱蜡均用二甲苯冬天需加温脱蜡10℃左右，然后浸入95%AC去二甲苯再水洗水化，使切片清亮。 操作过程： 先取病变组织于AAF中固定3－5分钟。 95％酒精1分钟。 无水酒精1分钟 正丁醇1/3丙酮2/3混合液1分钟 二甲苯1分钟 浸蜡1－2分钟 包埋，将组织置于预先备置的蜡块中（固体石蜡包埋法）;预备一硬蜡块，用热镊子于蜡块中间熔蜡一小部分，在以热镊子从蜡杯内取出已与石蜡饱和之组织块投入融蜡中，冷固后，立即进行石蜡切片。石蜡切片附贴后，在火上稍加烘烤使组织切片上石蜡全部熔化，水分也被烘干，然后投入二甲苯，100％酒精，95％酒精各30秒脱蜡，入水冲洗，常规苏木素，伊红染色。  总结组织制片过程 收集标本（活检、尸检、动物实验→取材固定切块（2×1×0.3→自来水冲洗（1-2h）→组织脱水（70%乙醇、80%乙醇、 90%乙醇、 95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ 1-2h）→组织透明（二甲苯30’）→浸蜡（软、硬蜡、大组织4—16h），组织2—4h，→包埋→冷却修蜡块→焊蜡块→切片→贴片→烤片→切片脱蜡→切片染色（常规HF和特染）。 自动脱水、透明、浸蜡机 包埋机 切片机 漂烘仪 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 1．尸检及活检 有条件时，将组织分别进行脱水，如脑、胰腺、肌肉、胸腺或淋巴结、肝、脾等组织。因为脱水时间差异性较大，最好是单独处理。2．动物组织 应区分动物大、小，如狗组织接近新生儿组织，大白鼠和小白鼠也有差异，前者需时稍长，后者则较短。 3．脱水时间与脱水剂的关系 脱水剂的新旧（纯度）影响脱水时间，必须灵活掌握。4．穿刺组织 如肾穿刺、径胃镜取得组织等，因组织块很小，常规用擦镜纸包裹，防止丢失。 二、脱水剂的种类和效果1．非石蜡溶剂的脱水剂 如乙醇和丙酮等，其组织在脱水后必须再经二甲苯透