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细胞工程实验讲义 哈尔滨商业大学食品工程学院 生物工程专业 曲 敏 实验一 番茄的胚轴、子叶培养 一、实验目的 愈伤组织的诱导和正确地运用激素诱导形态建成是植物组织培养中最常用的基本技术，通过实验使学生们了解这一操作过程的要点与技能，及快速繁殖的技术过程。 二、实验原理 高等植物细胞具有全能性，在高等植物细胞分化过程中，即使是高度分化的植物细胞，它们的遗传潜能并没有丧失，仍保持着潜在的全能性。已分化成熟的活细胞在一定的营养因素作用下，有可能恢复遗传全能性，类似合子的发育功能，由单细胞发育成胚装体，继而形成完整的植株。在植物组织培养中，激素在愈伤组织的形成及形态建成中起着重要作用。在一定的范围内，生长素/激素的比例高时，产生根，反之则产生芽。通过变换激素的种类和浓度，能有效地调节培养组织的器官分化。 二、实验用品 （一）、器材 超净工作台、培养箱、工形镊子、解剖剪刀、三角瓶、培养皿、滤纸、酒精灯、脱脂棉、烧杯、量筒、封口膜、振荡培养膜、 （二）、试剂 MS基本培养基、次氯酸钠、IAA、BA、蔗糖、乙醇、去离子水、1mol/L HCL、1mol/L NaOH （三）、材料 “美国大红”番茄种子 三、实验准备——培养基配制 在植物组织培养使用的培养基中，涉及的药品较多，而且许多微量元素在配制培养基时不能直接称取，故为了方便培养基的配制以及减少微量元素的称量误差，常常在配制培养基前先配制培养基的母液。植物组织培养基的母液分为大量元素母液、微量元素母液、维生素母液和各种激素母液等。 1、MS培养基母液配制 成分 1× 20× （1）、大量元素 mg/L g/L NH4NO3 1650 33 KNO3 1900 38 CaCl2.2H2O 440 8.8（无水6.64） MgSO4.7H2O 370 7.4 KH2PO4 170 3.4 （2）、微量元素 1× 100× KI 0.83 83mg H3BO3 6.2 620mg MnSO4.2H2O 15.6 1560mg ZnSO4.7H2O 8.6 860mg CuSO4.5H2O 0.025 250mg CoCl2.6H2O 0.025 250mg Na2MnO4.2H2O 0.25 25mg （3）、铁盐 200 × FeSO4.7H2O 5.57g Na2EDTA.2H2O 7.45g （4）、有机 1× 100× 肌醇 100 10000mg 烟酸 0.5 50mg 甘氨酸 2 200mg 维生素B1 0.4 40mg 维生素B2 0.5 50mg 注：配制铁盐溶液时，将二种药品分别置于450ml的蒸馏水中，加热并不断搅拌，使之溶解，然后将二种溶液混合，把PH值调到5.5。最后加重蒸馏水定容到最终容积1000ml。每升培养基取5ml（5ml/L）。 2、MS培养基的配制 1000ml培养基取大量元素（20×）50ml 1000ml培养基取微