綜合性实验.docVIP

实验时间：2010.5.9 实验室编号： 836 1 实验目的 1.1 应用所学的无机化学和分析化学的知识设计一定的项目。 1.2 学习查阅文献、综合资料以及提高自己的动手的实验能力。 1.3 牛奶中部分成分的分析 1.3.1 设计合适的实验方法来分析牛奶中蛋白质、钙、铁、锌含量，学习利用等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白，熟悉可见光分光光度计的操作。 1.3.2 掌握双缩脲法测定蛋白质的原理和方法，掌握配位滴定法测定液体食品中钙含量的原理和方法，掌握配位滴定法测定液体食品中钙含量的原理和方法，掌握邻二氮菲法测定铁含量的原理和方法，学习用双硫腙分光光度法测定微量锌的方法，通过与牛奶包装上注明的含量比较，学会对自己实验分析结果进行客观评价。 1.4 酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究 1.4.1 认识生物体中酶的存在和催化作用，了解各种化学、物理因素对酶促反应的影响，认识一些生物化学过程的特殊性。 1.4.2 掌握生物活性物质的提取和保存方法，了解研究催化反应特别是生物化学体系中催化过程的基本思想和方法。 1.4.3 掌握光度法测定酪氨酸酶催化1-3、4二烃基苯丙氨酸（l-DOPA）氧化反应的米氏常数（Km）最大反应速度（vm）的方法，以及研究抑制剂对酶活力的影响。 1.5 槲皮素-金属配合物的合成及清除自由基能力的研究 1.5.1 利用槲皮素与金属盐将其分别配成槲皮素-锌（Ⅱ）、槲皮素-铜（Ⅱ）、槲皮素-铁（Ⅲ）配合物。 1.5.2 槲皮素及其金属配合物在Fenton反应机制产生羟自由基的体系中进行了响应行为的比较和探讨。 1.5.3 槲皮素及其金属配合物产生过氧自由基的体系中进行了响应行为的比较和探讨。 2 实验原理 2.1 牛奶中部分成分的分析 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。 钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。 当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。 吸光度用A表示 ;A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L ;影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。符号A，表示物质对光的吸收程度。 邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量Fe2+的高灵敏度显色剂在pH 2～9的条件下，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm波长处有最大吸收[1]。 该配合物的 lgk稳 ＝ 21.3（20 ℃），摩尔吸光系数 510 =1.1×104L?mol-1?cm-1 。 在显色前，首先用盐酸羟胺把 Fe3+ 离子还原为 Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl ＝ 2Fe2++4H+ +2Cl- +N2↑ +2H2O 测定时，控制溶液的酸度在 pH＝5 左右较为适宜。酸度高时，反应进行较慢；酸度太低，则 Fe2+离子水解，影响显色。当铁浓度在5.0 mg／mL以内时，吸光度与Fe2+浓度呈直线关系。Bi3+、Cd3+、Hg9+、Ag+、Zn2+等离子在 pH ＝ 2~9 时与邻二氮菲生成沉淀。 Co2+， Ni2+， Cu2+等离子可与邻二氮菲