荧光光谱-北京大学单分子与纳米生物学实验室.ppt

生色团 Trp Tyr Phe Y-base 条件 H2O,pH7 H2O,pH7 H2O,pH7 Yeas t-RNAPhe ?ex nm 280 274 257 320 ?max 10-3 5.6 1.4 0.2 1.3 ?em nm 348 303 282 460 ?F 0.2 0.1 0.04 0.07 ?F ns 2.6 3.6 6.4 6.3 敏感度?max?F 10-2 11 1.4 0.08 0.91 亚硝基奈酚+Tyr 茚三酮（Cu2+,pH5.8)+Phe ?ex:460nm, ?em:570nm ?ex:365nm, ?em:515nm 四 荧光生色团的结构特点 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 五 影响荧光测量的因素 1 光化分解（photodissociation） 光照后导致化学键断裂——荧光减弱 2 淬灭(quenching) 温度淬灭： 温度每升高10C ，荧光减少的百分比，称为温度系数。 在20-300C的范围内，温度系数大约为1.5。 浓度淬灭： 21 内滤光效应（inner filter effect) (3)杂质淬灭：3O2 1O2 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3 溶液pH的影响 利用一些物质在不同pH值溶液中荧光强度和颜色的改变， 可以判别各种滴定的终点。 指示剂 颜色变化 pH范围 萘 酚 无色变黄绿 8.2-10.3 荧光素 浅绿变绿 4.0-5.0 丫啶橙 浅黄绿变黄 8.0-10.0 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 4 溶液极性的影响 荧光物质在非极性溶液中的发射峰位比其在极性溶液中的峰位向短波方向 （或高频方向）移动，即蓝移，同时荧光强度前者也高于后者。 DPH 水溶液中 膜 中 发射波长：440nm 发射波长：430nm Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 5 溶剂和化学试剂 (1) 溶剂选择要适宜 例如：苯、丙酮、酚在紫外波段有吸收。 (2) 溶剂要纯 6 荧光污染 (1) 涂活塞用的润滑油以及橡皮塞和软木塞 (2) 去污剂 (3) 微生物污染 (4) 滤纸 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 六 荧光分光光度术的应用 (一）.物质的检测 1 测量原理： 稀溶液， F= ? I0εcL 2 结构特点：含有“芳香环”结构 3 灵敏度：10-7~10-8g/ml Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 检测物质 维生素A 维生素B2，pH7 维生素B12， pH7 维生素C 3,4-苯并芘10-6g/ml 5羟色胺，中性或弱酸性 5羟色胺，盐酸 激发波长nm 345 370 275 490 381 295 295 发射波长nm 490 565 305 530 403 330 550，330 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2