【2017年整理】HIV实验室指南全解_VOLAB 实验室建设指南.docx

HIV实验室指南全解_VOLAB?实验室建设指南人类免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus,HIV)及其相关标志的检测是预防HIV感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的诊断、HIV感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及HIV感染者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及HIV疫苗的安全性和效果鉴定等。HIV感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从HIV感染者体内分离出病毒或检出HIV组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指HIV感染所产生的HIV抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指HIV感染后与艾滋病病情进展有密切关系的某些标志，如CD4细胞、CD8细胞，β2微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可为HIV感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前HIV抗体的检测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为HIV抗体是患者感染HIV后最容易检出并且持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。在介绍各种HIV实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的HIV以及由它所导致的致命性危害有基本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有关内容扼要介绍如下：一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述：（一）?艾滋病病原体的发现和命名：(二)HIV病毒的形态结构、分类和分型HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在分类上属于逆转录病毒科中的慢病毒亚科。目前发现有HIV-1和HIV-2两型。现已将HIV-1分为M组，共10个亚型(A-J)和O组，HIV-2也至少有6个亚型（A-F）。在我国流行的是HIV-1，检测到的亚型有8种之多，其中B亚型几乎见于我国各个地区，而C亚型主要见于我国西南和西北地区，E亚型则多见于东南沿海和西南边境地区。HIV病毒呈球形或卵圆形颗粒，直径100-140mm，具有包膜。包膜是在病毒出芽释放过程中获得的。从脂质膜上延伸出来的刺和园头是糖蛋白(gp)。病毒颗粒内部为核心，具有蛋白质衣壳，里面有两个相同拷贝的核酸(RNA)和病毒的三种酶：逆转录酶(RT)、整合酶和蛋白酶。HIV基因组(RNA)含有9个基因，可分为结构基因和调节基因。结构基因包括gag、pol和env3个，皆为调节基因。(三)与诊断技术密切相关的HIV抗原由三个结构基因编码的HIV-1抗原如下：1、gag蛋白：位于病毒颗粒内核心部位，主要有分子量为55000道尔顿的蛋白质(P)，称P55。P55抗原是前体蛋白，在感染过程的早期产生，尔后裂解成其他核蛋白，包括P24、P17和P15等。2、env(包膜)糖蛋白：包膜抗原皆为糖蛋白(gp)，根据分子量分别称为gp160、gp120和gp41。gp160是前体蛋白，是在感染过程中产生的一种成份，随后裂解成gp120和gp41。gp120是外膜蛋白，组成外膜的72个刺突和园头。gp41为跨膜蛋白。二者共同参与病毒与突主细胞CD4分子的粘附。3、pol(聚合酶)蛋白质：包括P66(RT)、P51和P31(整合酶或核酸内切酶)。尽管HIV-1和HIV-2抗原之间有交叉，但它们也有各自的特异性抗原。大多数交叉反应是由抗核心抗原的抗体所致，因为这二种不同病毒的gag抗原是非常保守的。各自的这些特异性抗原在HIV-1和HIV-2是相似的，但分子量可略有不同。例如，HIV-2的跨膜蛋白抗原称为gp36，而某些人则称之为gp41，又如主要的核心抗原为P24，但在HIV-2又称P26。(四)HIV感染的生物学和免疫应答：人体能对HIV的侵入产生抗体应答，通常是在HIV感染2-10周内机体产生抗体。但也有极少数人感染数月乃至数年后仍测不出抗体，故阴性结果并不说明受检者绝无感染。绝大多数人在感染过程中都会对各种病毒抗原成份产生免疫应答，抗体滴度可高达1：50000，但也可以很低。感染早期（血清阳转时）及病程后期（免疫缺陷）时，抗体滴度均较低。大多数病毒感染者都有IgM抗体产生，但HIV感染者中似乎不完全有IgM应答。对于有IgM抗体应答者，在窗口期检出IgM抗体是有益的。HIV基因组可整合到宿主细胞DNA上使机体终身带有病毒，但机体可能很多年不出现症状，成为HIV无症状感染者，只是查血时发现抗—HIV阳性。尔后，在某些因素作用下，病毒被激活后并开始大量复制出现症状和各种合并症，则发展成艾滋病病人，HIV病毒很容易发生变异这是研制有效疫苗的主要