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植物组织培养实训指导书 实训一? 植物组织培养室参观与设计一、目的要求???? 通过参观，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时，熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具。二、仪器与用具 1 、仪器： 超净工作台，空调机，蒸馏水发生器或纯水发生器，高压灭菌锅，低温冰箱、普通冰箱，电炉，显微镜，天平、恒温培养箱，烘箱等设备。2 、用具： 各种培养皿，分注器，各种实验器皿和各种器械用具。 三、方法步骤 1 、先由指导老师集中介绍组织培养实验室守则及有关注意事项。2 、先由指导老师讲解本次实验的目的、仪器设备和器皿用具的名称及实验步骤。3 、指导老师逐一讲解组培实验室的构建情况，包括准备室（又称化学实验室）、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室等使用的各种仪器设备和器皿用具的名称用途。1 ）准备室（化学实验室）面积： 20m 2 左右用途：器皿洗涤、培养基配置、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析，试管苗出瓶，清洗及整理工作。要求：明亮、通风设备：工作台，橱柜，水池，仪器，药品等2 ）缓冲室面积：约 3-5m 2 左右用途：进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的工作服、拖鞋，戴上口罩。设备： 1 盏紫外灯， 1 个配电板，石英电力时控器等3 ）无菌操作室（无菌室，接种室）面积： 10-20m 2 ，视生产规模和超净工作台数量而定。用途：材料的灭菌接种，无菌材料的继代，丛生菌的增殖或切割，嫩枝扦插生根等，是关键的部分，关系到培养物的污染率、接种工作效率等重要指标。要求：干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。门窗要密闭，一般用移动门窗。设备：超净工作台、空调机，医用小平车，操作台、搁架等。4 ）培养室面积：视培养架多少及培养物数量而定。用途：将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。设备：?培养架与灯光培养架数目多少视生产规模而定，年产4万—10万苗需4—6个培养架；年产10万 —20万苗约需 8—10个培养架。每个培养架一般 6 层，总高度 2m ，每 0.3m 为一层 , 最下一层距离地面 0.2m 架宽以 0.6m 为好，架长以 40W 日光灯的长度来决定，即约 1.26m 。每层架子安装 2 盏日光灯。?通风设备在稍高处设置进风气窗，在其对侧近天花板处设置排风窗。?边台、空调机、加湿器（除湿器）、各类显微镜、温湿度计。5 ）驯化室面积：视生产规模而定。用途：组培苗（试管苗）移栽前进行炼苗。要求：清洁无菌设备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器。6 ）温室面积：视生产规模而定。用途：保证试管苗不分季节地常年生产。设备：温度控制装置、通风口、喷雾装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具及相应药物。实 ?植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌目的要求 1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。 3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。 二、仪器与用具 1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。 2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。 三、方法步骤 （一）植物组织培养室的灭菌 1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。 （1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。 （2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。 （3）注意事项： ??墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏； ??注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。 2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。 （1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。 （2）方法：首先房子要密封。然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。（3）注意事项： ??操作前要戴好口罩及手套； ??倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。操作时人要迅速避开烟雾； ??3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。 3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。 4、用紫外灯照射20—30min。 5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法） （1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。 （2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。 （3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。（切忌干