【2017年整理】精制抗狂犬病血清制造及检定规程.docx

精制抗狂犬病血清制造及检定规程 本品系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制得的液体或冻干免疫球蛋白制剂。仅用于配合狂犬病疫苗对被疯动物严重咬伤者进行预防注射。对已有狂犬病临床症状的患者，注射本制品无效。 1　制造 1.1对血浆的要求 1.1.1　用于制造精制抗狂犬病血清的血浆除须按附录1《抗狂犬病血清生产用马匹免疫方法》中的要求外，应符合《抗毒素生产用马匹免疫方法》的规定。在保存期间如发现明显的溶血、染菌及其他异常现象，不得投入生产。 1.1.2　血浆的中和效价不得低于80IU/ml。 1.2　制造程序 按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。 1.3　制造工艺的要求及规定 按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。 1.4　半成品检定 按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.4项进行。 2成品检定 由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。 2.1　鉴别试验 按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。 2.2理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验及类A血型物质测定等项均按《精制抗毒素制造及规定规程》中2.2～2.6项规定进行。 2.3　效价测定 2.3.1　按《精制抗狂犬病血清效价测定方法》（附录2）进行。效价测定用血清标准品由中国药品生物制品检定所分发或认可。 2.3.2　效价要求 精制抗狂犬病血清效价在200IU/ml以上为合格。 3保存与效期 保存于2～8℃。自效价测定合格之日起，液体制品效期为3年；冻干制品效期为5年。 附录1　抗狂犬病血清生产用马匹免疫方法 1　马匹 用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。 2　抗原及佐剂 2.1基础免疫用抗原 用羊脑死毒抗原或羊脑固定毒抗原，灭活前病毒滴度应在7.0Log/1.0ml以上。 2.2　超免疫用抗原 用羊脑固定毒抗原或细胞培养疫苗抗原。 2.3　所用抗原及佐剂不得含有人体成分。 3　免疫与采血 3.1马匹免疫采血参照《抗毒素生产用马匹免疫方法》中有关规定进行。 3.2基础免疫 在超免疫前应适当进行基础免疫。 3.3　超免疫 基础免疫1月后可进行超免疫。 3.4　采血指标 血清效价在100IU/ml以上。 4　效价测定方法 按《精制抗狂犬病血清效价测定方法》（附录2）进行。 附录2　精制抗狂犬病血清3效价（IU）测定方法 1　中和用病毒悬液的制备 要求中和用病毒悬液经37℃水浴作用1小时的LD50在32～320之间。 1.1病毒株的选择：选用CVS毒种。 1.2　病毒株的传代：取CVS毒种（一般为冻干毒种）制成10-2悬液，脑内接种体重10～12g健康小白鼠0.03ml，待发病后取脑再制成10-2悬液，接种于小白鼠脑内进行传代，一般传至2～3代即可制成冻干中和用病毒或–70℃冻存的中和用病毒，但要选用小白鼠在第5天发病并麻痹的服制备。 1.3　冻干病毒的制备：用第5天发病并麻痹的鼠脑以脱脂牛乳研磨稀释成20%的脑悬液，按0.5ml分装安瓿冻干后真空封口，存-30℃待用。 1.4-70℃冻存病毒的制备：用第5天发病并麻痹的鼠脑用20%小牛血清磷酸盐缓冲液研磨稀释成10-1悬液，经2000r/min20分钟沉淀，取上清混匀后分装小管，存-70℃冰箱待用。 1.5　病毒悬液的预测 1.5.1冻干病毒的预测：取含20%脑悬液的冻干病毒，启开后加入含2%小牛血清PBS1.0ml，吹打均匀后再用4.0ml上述稀释液与病毒液充分混匀，1500r/min沉淀10分钟，取上清与等量的稀释液混合则为10-2悬液，然后再用10-3、10-4、10-5、10-6稀释，从10-6至10-2各取0.5ml加入5个小管内，每管再加入2%小牛血清PBS0.5ml，放置37℃水浴一小时。用体重10~12g小白鼠30只，分成5组，每组6只，经用37℃作用的10-6至10-2病毒悬液接种小白鼠，每个稀释度接种6只小白鼠，每只小白鼠脑内接种0.03ml，观察14天，每天观察小白鼠发病死亡情况，接种后4天内死亡的小白鼠按非特异性死亡计。以接种5天后的发病死亡小白鼠统计LD50。 1.5.2-70℃冻存病毒悬液的预测：取含10%脑悬液的冰冻病毒用流水融化后即为10-1悬液，然后再做10-2至10-7稀释。从10-7至10-3各取0.5ml加至5个小管内，每管再加入2%小牛血清PBS0.5ml，放置37℃水浴1小时，用体重10～12g小白鼠30只，分成5组，每组6只，用经37℃作用的10-7至10-3病毒悬液接种小白鼠，每个稀释度接种小白鼠6只，每只小白鼠脑内接种0.03ml，观察14天，每天观察小白鼠发病死亡情况。接种后4天内死亡的小白鼠按非特异性死亡计。以接种5天后的发病死亡小白鼠统计LD50。 1.5.3按以上二种病毒的悬液预测的结果