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广州医科大学 机能学科实验中心学生设计性实验方案 一、基本情况 项目名称 加味小柴胡对尘螨过敏型哮喘的治疗效果研究 课　题　组　成　员 姓　名 学 号 班　别 联系电话 陈建彬 2012111392 12级肿瘤班 陈杰昌 2012111393 12级肿瘤班 方顺宏 2012111395 12级肿瘤班 何紫明 2012111396 12级肿瘤班 黄浩纬 2012111397 12级肿瘤班 黄鑫键 2012111398 12级肿瘤班 罗键雄 12级肿瘤班 叶燕彬 12级肿瘤班 张伟聪 12级肿瘤班 指导老师 二、实验的目的 尝试利用尘螨提取液建立小鼠支气管哮喘模型，包括急性和慢性哮喘模型 探究中药（加味小柴胡汤）和西药（地塞米松、氨茶碱）对大鼠哮喘的治疗效果 对比疗效，尝试提取中药对哮喘的有效成分 主题词： 1.支气管哮喘 2.动物模型 3.加料小柴胡汤 三、实验背景 哮喘是当今世界最常见的慢性呼吸道疾病之一。哮喘发病率及死亡率逐年升高, 但至今对其发病机制仍不十分清楚。 中医认为，痰阻气道、肺失宣降、风盛痰阻、气道挛急是哮喘发病的主要病理机制。而西医认为支气管哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与气道慢性炎症性疾；这种慢性炎症导致气道高反应性的产生，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）凌晨发作、多数患者可自行缓解或经治疗缓解。 我们在查阅相关文献后发现，多数学者认为，哮喘的特征是气道的慢性变应性炎症，在其发病因素中最重要的外因是变应原。在致敏变应原中，由于尘螨是最常见的哮喘变应原，80％的哮喘患者 对尘螨过敏，其在哮喘中的地位已经确认。[1、2]因此，我们采用尘螨做为我们实验造模的变应原。同时，由于考虑到纯化的尘螨提取液价格昂贵，我们将采用粉尘螨滴剂（5号滴剂市售170元/2ml）作本次实验的致敏原。 粉尘螨滴剂在临床上适应症为用于粉尘螨过敏引起的过敏性鼻炎、过敏性哮喘的脱敏治疗。主要成分是粉尘螨（Dermatophagoides farinae）代谢培养基生理盐水浸出液。在治疗过程中，将粉尘满滴剂分为5个梯度，按浓度递加，达到脱敏的效果。我们将根据免疫学原理，利用5号滴剂（蛋白浓度1000ug/ml）对小鼠进行致敏处理和哮喘激发处理[3]。通过观察一些相关指标，判断造模是否成功。 中医认为哮喘是一种发作性痰鸣气喘疾患，具有反复发作、缠绵难愈的特点。临床上常用麻黄汤，平喘汤、小青龙汤、三拗汤。 [1]吴海洪，黎曼.尘螨与支气管哮喘.[J]中国实验诊断学.2013年12月第17卷第12期：2283-2285 [2]郝敏麒，徐军，钟南山. 尘螨致敏小鼠肺部变应性炎症模型的建立.[J]中国病理生理杂志.2003,19(1):139-141 [3]商艳,李强,黄怡,等.不同剂量致敏原对小鼠过敏性哮喘模型的影响.[J]第二军医大学学报.2002.06.23(1):69-71 四、实验仪器、材料、试剂 实验仪器： 鼠笼6只，1000ul移液枪2个，1ml注射器2个，灌胃针头2个，注射针头2个,盖玻片、载玻片一批，光学显微镜1台，小鼠耳钉50个，烧杯一批，药煲1个，冰箱1个，电子天平1个，离心管10支，离心机1台， 2.实验动物： 健康成年BALB/c小鼠25只，体重相近，雌雄不限。25元/只。 3.实验试剂： 1.【畅迪】粉尘螨滴剂5号15支（粉尘螨（Dermatophagoides farinae）代谢培养基生理盐水浸出液 ，蛋白浓度1000ug/ml）:150元/2ml。 2.2%氢氧化铝溶液50ml 醋酸地塞米松片（0.75mg*100s）：6元/瓶 氨茶碱片（0.1g/100s):3元/瓶 生理盐水3L 0.3%戊巴比妥80ml 10%甲醛 100ml 无水乙醇2L HE染色试剂一套 溴酚蓝溶液40ml IL-4 ELISA试剂盒 INF-γ ELISA试剂盒 肝素20ml 五、实验内容、方法 5.1小鼠过敏性哮喘模型的建立 在国内外研究中，我们发现小鼠哮喘模型的建立有很多方法[1],其中以鸡卵白蛋白（OVA）诱发和尘螨诱发支气管哮喘两种方法，技术比较成熟、成功率较高。本次我们采用尘螨诱发支气管哮喘，优点是尘螨是最常见的哮喘变应原，较OVA诱发更接近人体情况。 5.1.1模型建立预实验 预实验组取BALB/c小鼠5只，按尘螨滴剂剂量分为5组，每组剂量（ul）别为20、40、60、80、100。对每只小鼠行以下操