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　竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成反比。操作步骤如下： 　　（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。 　　（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原医学教丨育网整理的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 　　（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多 1 包被抗原，酶标二抗进行的间接竞争法2 包被抗原，酶标一抗进行的标记抗体直接竞争法3 包被抗体，标记抗原进行的标记抗原直接竞争法，双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： ??双抗体夹心法 一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 双向扩散试验沉淀线的形态和位置的4种分析 ? ?? 1．抗原或抗体的存在与否及其相对含量的估计? 沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致。沉淀线如靠近抗原孔，则指示抗体含量较大；如靠近抗体孔，则指示抗原含量较多。不出现沉淀线则表明抗体或抗原过剩。另外，如出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单一的成分。因此，可用于鉴定抗原或抗体的纯度。 双扩散各种孔型图 ??? 2．抗原或抗体相对分子量的分析? 抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量的影响。分子量小者扩散快，反之则较慢。由于慢者扩散圈小，局部浓度较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方。如若两者分子量相等，则形成直线。图显示左侧沉淀线抗原分子量大于抗体，右侧沉淀线则抗体大于抗原，中间一条线则为两者相等。抗体多为IgG，分子量约15kD，未知抗原的分子量可做粗略估计。 抗原抗体相对分子量示意图 ??? 3．用于抗原性质的分析? 两种受检抗原的性质可完全相同、部分相同或完全不同。三种情况在双向扩散中表现的基本图形见图 三种双扩散基本图形 ??? 从图可以分析出，左图中两种受检抗原(Ag-a)完全相同，形成一个完全融合的沉淀线；右图中抗体为双价，两种抗原完全不同(Ag-a和Ag-c)；中图的抗体为双价，两种抗原(Ag-ab和Ag-ac)皆有相同的a表位，又有不同的b和c表位，所以沉淀线呈部分融合的形状。这种技术作为抗原的分析，是目前免疫化学中最常用的鉴定技术之一。 ??? 4．用于抗体效价的滴定? 双向扩散技术是抗血清抗体效价滴定的常规方法。固定抗原的浓度、稀释抗体；或者抗原、抗体双方皆作不同的稀释，经过自由扩散，形成沉淀线。出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。 ? ??免疫电泳是指一定量可溶性的抗原物质与相应抗体借用琼脂糖为载体在一定电场强度下以合适的比例加速结合形成复合物，并以沉淀线(或峰)的形式表现出来，通过观察和分析沉淀线(或峰)的性质而对抗原抗体进行定性定量。该技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。这种技术有两大优点，一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应，以此做更细微的分析。免疫电泳技术的种类很多，这里仅将常用的技术介绍如下。 电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移。电泳