第一讲：遗传物质——DNA与RNA解析.ppt

遗传物质——DNA与RNA （1）储存并表达遗传信息: （2）能够复制，把遗传信息传递给子代： (3) 物理和化学稳定性： （4）有遗传变化的能力： 核酸（DNA、RNA）的化学组成 核酸的元素组成 3 DNA的一级结构：即是指四种核苷酸(dAMP、dCMP、dGMP、dTMP)按照一定的排列顺序，通过磷酸二酯键连接形成的多核苷酸也称为碱基顺序。 1 DNA双螺旋模型的提出 2 维持DNA双螺旋的力 3 双螺旋结构的基本形式 4 变性和复性 1 DNA双螺旋模型的提出 研究背景： 1950年，大量不同来源DNA样品的分析发现了DNA组成的当量规律，即A＝T，G＝C，A＋G＝C＋T。 不同生物种属的DNA碱基组成不同， 同一个体不同器官、不同组织的DNA具有相同的碱基组成。 理论化学家L. Pauling运用化学的简单定律来推理，研究了蛋白质?-螺旋结构，此方法启发了Watson和 Crick。 M. Wilkins、R. Franklin等在DNA的X－射线晶体结构方面作出了重大的贡献。 R. Franklin的X-射线衍射图 DNA双螺旋结构模型的提出： DNA双螺旋结构模型的要点： ① 脱氧核糖和磷酸通过3’,5’磷酸二酯键交互连接，成为螺旋链的骨架。 两条链方向以反向平行的方式组成右手双螺旋。 ② 碱基互补配对：只有A和T配对，G和C配对才能满足正常螺旋（直径20 ? ）的要求和chargaff的当量规律。 ③ 螺旋参数 螺旋直径２nm。 螺旋每旋转一周10对碱基， 每个碱基的旋转角度为36°。 螺距3.4nm； 碱基平面之间的距离为0.34nm。 ④ 大沟小沟 对于遗传上有重要功能的蛋白质识别DNA双螺旋结构上的特定信息是非常重要的。 大沟(2. 2nm) 小沟(1. 2nm) 2 维持DNA双螺旋的力 氢键 GC之间有三条氢键，AT之间有两条氢键，这是DNA双螺旋结构的重要特征之一，DNA的许多物理性质如变性、复性以及Tm值等都与此有关。 碱基堆集力 DNA同一条链相邻碱基之间的非特异性作用力，包括疏水作用力和范德华力。 疏水作用力：不溶于水或难溶于水的两个分子在水中具有相互联合，成串联地结合在一起的趋势。 嘌呤和嘧啶有一定程度的疏水性，双螺旋结构内部形成一个强大的疏水区，使DNA相邻的碱基有相互堆集在一起的趋势，这是形成碱基堆集力的重要因素之一。 范德华力：存在于分子间的一种吸引力； DNA双链中嘌呤环和嘧啶范环德华的半径是1.7 ?左右 ，其累积的范德华力是相当可观的，这样范德华力加强了疏水作用，这是形成碱基堆集力的另一个重要因素。 氢键与碱基堆集力的协同作用 已经堆基的碱基更容易发生氢键的键合，相应地已经被氢键定向的碱基更容易堆集。 两种作用力相互协同，形成一种非常稳定的结构。如果一种作用力被消除，另一种作用力也大为减弱。 3 双螺旋结构的基本形式 三种不同形式的DNA构象 A，B，Z型双螺旋的特性 A构象:在相对湿度75％以下获得的DNA纤维具有不同与B-DNA的结构特点。DNA-RNA杂交分子和RNA-RNA双链结构均采取A构象。 Z-DNA的形成是DNA单链上出现嘌呤和嘧啶交替排列所造成的，比如CGCGCGCG或CACACACACA。 Z-DNA有什么生物学意义呢? Z-DNA在热力学上是不利的。带负电荷的磷酸根距离太近，产生静电排斥。 DNA链的局部不稳定区的存在就成为潜在的解链位点。 DNA解链是DNA复制和转录等过程中必要的环节，因此Z-DNA的结构与基因调节有关。 变性和复性 变性 核酸变性程度的鉴定——紫外测定法： 原理： 嘌呤碱、嘧啶碱存在共轭双键，碱基、核苷、核苷酸、核酸在240-290nm处有强烈的紫外吸收，最大吸收峰在260nm处。 紫外光吸收值： 1 双链DNA A260=1.00 2 单链DNA A260=1.37 3 自由碱基 A260=1.60 影响DNA Tm值大小的因素： DNA的均一性： G-C含量： Tm值计算公式：Tm＝69.3+0.41 (G+C)% GC%=（Tm-69.3）×2.44 介质中的离子强度： DNA保存在高浓度的缓冲液中，如 1mol/LNaCl中。 复性及杂交 DNA复性 变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象，又称为退火。 DNA的复性的条件有两个： （1）有足够的盐浓度以消除磷酸基的静电斥力； （2）有足够高的温度以破坏无规则的链