选修3基因工程分析.ppt

4.人工合成法 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 ③化学合成法： 适用范围： 已知核苷酸序列，基因的核苷酸数量较少。 ①DNA合成仪合成：利用合成仪按照人们预先设定的DNA序列,从无到有,从头合成 ②反转录法：（cDNA文库） 小结：目的基因的获取 1.获取目的基因的常用方法 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 人工合成 PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制(PCR扩增仪内) 主要在细胞核内 热稳定的DNA聚合酶（Taq酶） 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 解旋酶、 普通的DNA聚合酶等 人工合成法： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 ③化学合成法 ： 适用范围： 已知核苷酸序列，基因的核苷酸数量较少。 ①DNA合成仪合成：利用合成仪按照人们预先设定的DNA序列,从无到有,从头合成 ②反转录法：（cDNA文库） ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代 ②使目的基因能够表达和发挥作用 1、基因表达载体构建的目的？（P11） 第二步：基因表达载体的构建——核心 思考：一定数量的目的基因与载体混合后，加入DNA连接酶，两两连接的重组DNA有几种？ （含有目的基因） （载体） 环状 启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。 终止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA片段，使转录在所需要的地方停止下来。 标记基因：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因 ①目的基因 ②启动子 ③终止子 ④标记基因 启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。 第三步：将目的基因导入受体细胞 思考1：常用的受体细胞有哪些？ 动物、植物、微生物。 思考2：什么叫转化？ 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 （1）农杆菌转化法：常用于双子叶植物和裸子植物 1、将目的基因导入植物细胞 两次拼接？两次导入？ 组织培养技术 优点：经济有效 （3）花粉管通道法 （2）基因枪法 缺点： 成本较高 受体细胞 (单子叶植物) 我国科学家独创，转基因抗虫棉 方法：显微注射技术（最常用，最有效） 受体细胞：常用受精卵 过程： 目的基因的表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵发育 新性状动物 2、将目的基因导入动物细胞： 回忆： （1）生物的主要遗传物质是什么？ （2）DNA的空间结构和基本组成单位是什么？ （3）你还能画出四种脱氧核苷酸的结构简式吗？ （4）一条链上的脱氧核苷酸相互连接是通过什么来完成的？ （5）基因控制蛋白质的合成过程。 （6）中心法则的图解。 定向基因改造设想 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。 选修3 现代生物科技专题 基因工程 钦州二中高中生物备课组段敏 一、基因工程的基本内容： 基因工程的概念： 原理 基因重组 操作环境 生物体外 操作对象 基因（DNA） 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结 果 优点 ①打破生殖隔离②定向改造生物③时间短 人类需要的基因产物 基因工程的理论基础： 剪 切 荧光蛋白基因 水母 培育转基因荧光斑马鱼的过程是怎样的呢？ 普通斑马鱼 拼接 导入 荧光斑马鱼 表达 “分子手术刀” “分子缝合针” “分子运输车” 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 二、基因工程的基本操作工具： （1）分布：主要在微生物中。 （2）限制性内切酶的特性：一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并且能在特定的切点切割DNA分子。 （3）举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开；SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割。 １、基因的手术刀──限制性核酸内切酶(限制酶） ①识别回文序列： 在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与互补链反向读的顺序完全一致。 C G A A T T A T