精浆的生化检验技术三修__培训课件.pptVIP

* 检测意义 结构：丝氨酸蛋白溶解酶，属于膜结合性酶 功能：水解卵细胞的透明带及卵黄膜以达成一条通道，便于精-卵结合完成受精过程 顶体酶活性可反映精子质量，是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标 　四、精子顶体酶活力的测定 * 试验原理 BAPNA 　　硝酰基苯胺 BAPNA:Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺（410nm) 试剂 抑制剂　　　　　　缓冲剂 终止液　　　　　　底物液 精氨酸酰胺酶 * 操作方法 标本准备 以清洁塑料容器盛精液标本，液化标本室温可置3h，勿冷冻保存 按每管参加反应的精子数为7.5×106个，根据标本精子浓度(M×106/ml)，计算实验所需精液量v ml（计算方法：v=7.5/M） 试剂准备 反应液临用前配制底物﹢缓冲液﹦1﹕4 * 操作方法 　　测定管 　　对照管 　抑制剂（ ul ） 　　100 　　　100 各反应管加盖，以手指轻弹管底使沉淀精子均匀悬浮 　反应液（ ul ） 　　1000 　　　1000 　终止液（ ul ） 　　　100 　　　　　　　　　24℃准确孵育1h 　终止液（ ul ） 　　100 　　　　　　　　　2000g离心15min 0.5cm比色皿，410nm波长比色蒸馏水调零读取OD值 * 结果计算 单位定义 在24℃，水解1.0∪molBAPNA／min的 　底物量定义为1IU顶体酶活性