固定化酶2010[精选].pptVIP

① 操作稳定性：常用半衰期表示，即酶的活力降为初活力一半时所经历的连续操作时间。通常半衰期达到1个月以上时，即具有工业应用价值。 ② 贮藏稳定性：一般不能长期贮存，现做现用，否则活力逐渐下降。 ③ 热稳定性： 氨基酰化酶：天然酶70oC15min，活力几乎全部丧失，固定于DEAE-纤维素的固定化酶，可以保存60%活力，固定于DEAE-葡聚糖，可以保存80%活力。 ④ 对蛋白酶的稳定性：大多数天然酶经固定化后对蛋白酶的耐受力有所提高。可能的原因是由于空间位阻效应使蛋白酶不能进入固定化酶内部。 例如：氨基酰化酶，天然酶在胰蛋白酶做用下，活力保存23%，固定于DEAE-纤维素的固定化酶，可以保存33%活力，固定于DEAE-葡聚糖，可以保存87%活力。 ⑤对变性剂、抑制剂的抵抗能力 3.固定化酶的作用pH变化 酶固定化后，对底物的最适pH曲线常常发生偏移。 一般来说，带负电荷载体制备的固定化酶，其最适pH值较游离酶偏高，反之，若使用带正电荷载体的话，其最适pH值较游离酶偏低，即向酸性偏移。 曲线偏离的原因是微环境表面电荷性质对酶活力的影响。因为带负电荷的载体吸附阳离子，使固定化酶扩散层H+浓度高，外部溶液的pH必须向碱性偏移才能抵消微环境的作用，使酶表现最大活力。 4.固定化酶的最适温度的变化 酶反应的最适温度是酶热稳定性与反应速度的综合结果。因为固定化后，酶的热稳定性提高，所以最适温度也随之提高。 （三）固定化酶（细胞）的活力 固定化酶的活力即是固定化酶催化某一特定化学反应的能力。其大小可以用在一定条件下它所催化的某一反应的反应初速度来表示。 它的单位可定义为每毫克干重固定化酶每分钟转化底物的量： 用μmol/ min ·mg 或μmol·min-1/cm 2 测活时要注明条件：温度，搅拌速度，固定化原酶含量等 1）、活力测定方法分为： 间歇测定：在搅拌或振荡反应器中，在与溶液酶同样测定条件下进行，然后间隔一定时间取样，过滤后按常规进行测定。 连续测定：固定化酶装入具有恒温水夹套的柱中，以不同流速流过底物，测定酶柱流出液，根据流速和反应速度之间关系，算出酶活力。 活力回收= ×100% 3）、固定化酶（细胞）的半衰期 在连续测定条件下，固定化酶的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间称为固定化酶的半衰期。以t1/2表示。 固定化酶的操作稳定性是影响使用的关键因素，半衰期是衡量稳定性的指标。 2）、固定化酶的活力回收 固定化酶（细胞）热稳定性变化 固定化酶（细胞）对有机试剂（乙醇）稳定性变化 固定化酶（细胞）对酶抑制剂（尿素）的稳定性变化 固定化酶（细胞）对pH稳定性变化 固定化酶在工农业生产上的应用 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料 L-氨基酸 果糖浆 6APA L-门冬氨酸 L-苹果酸 低乳糖牛奶 乳糖 干蛋白 果汁脱苦 啤酒 植物白脱 脂肪酸 氨基酰化酶 葡萄糖异构酶或含该酶之菌体 青霉素酰胺酶 含有门冬氨酸的菌体 含有反丁烯二酸酶的菌体 乳糖酶 碱性蛋白酶 葡萄糖氧化酶和氧化氢酶 柚苷酶 木瓜蛋白酶 脂肪酶 脂肪酶 载体结合法 载体结合法或交联法 载体结合法 胶格包埋法 胶格包埋法 载体结合法 载体结合法 胶格包埋法 载体结合法 载体结合法或包埋法 胶格包埋法 载体结合法 乙酰-DL-氨基酸 葡萄糖 青霉素G 反丁烯二酸 反丁烯二酸 牛奶 牛奶 蛋白 桔类果汁 生啤酒 植物油 植物油 产 物 酶或细胞 固定化方法 原 料 类固醇 L-丙氨酸 D-苯甘氨酸 ATP 核苷酸类味精 乙醇 啤酒 L-亮氨酸 乙酸 乳酸 淀粉酶 杆菌肽 氢气 含脱氢酶及羟化酶的菌体 含有L-门冬氨酸、β-脱羧酶的菌体 氨基酰化酶 乙酰激酶 5’-磷酸二酯酶，5’-腺苷酸脱氨酶 Sacharomyces carlsbergensie 或S.Cerevisiae 同上 Serratia marcescens Aectobcter.sp. 乳酸杆菌与酵母 Bacillus substilis Bacill sp. Clostridium butyicum Rhodospirillium rubrum 胶格包埋法 包埋法 载体结合法 载体结合法 载体结合法 角叉胶或聚丙烯 酰胺胶包埋 聚乙烯氯或多孔砖 吸附或海藻酸包埋 角叉胶包埋 水合氧化钛吸附 明胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺或琼脂包埋 类固醇前体 L-门冬氨酸 乙酰-DL-苯