固定化酶试验[精选].pptVIP

基本要求 1.制作固定化α-淀粉酶。 2.进行淀粉水解的测定。 发展要求 通过此实验探讨固定化酶的应用价值。 实验原理 固定化酶就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 介质本身是不溶于水。 固定化酶的优点 管道化、连续化、自动化 酶不溶解在催化反应的溶液中，产物更易纯化 可反复使用 可较长时间地贮存和使用 固定化酶的固定方法 吸附法 偶联法 交联法 包埋法 吸附法 物理吸附法 酶蛋白分子吸附在惰性载体（不引起变性且能保持酶活力的载体） 离子交换法 利用蛋白质分子上带电荷基团（氨基、羧基）与离子交换剂形成离子键，再被交换结合至载体上 优点：适用的酶范围广，酶活性高 缺点：酶与载体的结合力较弱，酶容易脱落 偶联法（载体偶联法、共价偶联法） 酶蛋白上的一些基团（如羧基、巯基、咪唑基等）能在温和条件下与载体共价结合，从而被固定化。 结合部位必须不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 优点：结合稳定，适用范围广 缺点：操作复杂，条件不够温和，酶活性较低 交联法 交联法是指通过双功能试剂，将酶和酶联结成网状结构的方法。 结合部位也不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 优缺点与偶联法基本相同 包埋法 包埋法是将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中 优点：适用范围不广，酶活性高，稳定性也较高。 α-淀粉酶的固定化实验 载体：石英砂 固定原理：吸附法（物理吸附法） 淀粉：遇碘蓝色 （ 经α-淀粉酶催化） 糊精：遇碘红色 （经β-淀粉酶催化） 麦芽糖：遇碘不变色（棕黄色） （经糖化淀粉酶、麦芽糖酶催化） 葡萄糖 Ps：碘液是KI-I2的溶液 淀粉酶和石英砂混合后，搅拌30min。 加入注射器后，用大于10倍体积的蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的游离淀粉酶。 确定洗涤后收集到的液体中不再含有淀粉酶 放尽剩余的蒸馏水后关闭液体阀 控制流速加入可溶性淀粉溶液和收集反应后的溶液。 检测反应效果。 * *