AFP作業指导书2.0.doc

甲胎蛋白（AFP）检测作业指导书 检验目的 AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。70－95%的原发性肝癌患者的 AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/ml。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。 不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂,无脑症,食管atresia或多胎,AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Downs综合征的危险性 2.检验原理： 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 ·第1步：10μl标本、生物素化的抗AFP单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗AFP单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 ·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 ·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正， 3.性能参数： 3.1 线性范围：线性检测结果见AFP方法学验证记录。 3.2精密度:批内n=20,批间n=20。 批 内 间 ng/ml SD ng/ml CV% 均值ng/ml SD ng/ml CV% 1.04 0.03 1.26 11.35 0.3 2.64 3.3准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。 3.4 可报告范围: 0.605-60500 ng/ml，最大稀释倍数为50倍。 3.5 测量区间：血清/血浆: 0.605-1210ng/ml。 高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。稀释后的标本AFP含量必须高于20IU/ml(24ng/ml)。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。 3.6 灵敏度：0.605ng/ml 3.7特异性：无 4. 样本要求 4.1血清：按标准常规方法采集。 4.2血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。 4.3标本在2－8 度可稳定2天，-20 度可稳定6个月。只能冻融一次。 4.4含沉淀的标本使用前需离心。 4.5标本和质控品禁用叠氮钠防腐 5.试剂和设备： 5.1 设备：COBAS6000组合模块E601 （1）检查供水系统是否正常。 （2）检查试剂盖是否松开。 （3）接通仪器左侧上方电源按钮,仪器自检。 （4）登录：输入用户名及密码，仪器初始化，进行自动维护，然后进入Stand by态。 5.2 试剂厂商：罗氏诊断产品公司 5.3试剂及使用前准备 M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗AFP单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度4.5mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。 R2：Ru(bpy)32+标记的抗AFP单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度12.0mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。 储存和稳定性： 存放在2－8 度 ，切莫倒置。 未 开 封，可 稳 定 至 标 明 的 保 质 期。 开封后，2－8 度，12周； 放在COBAS6000上，8周； 注意：仅供体外诊断使用；避免皮肤直接接触液体试剂；废弃物按生物危害垃圾处理。 6.校准程序： 6.1校准品：罗氏COBAS6000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。 复溶：用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。 复溶后校准品成分的稳定性：2-8°C 储存。稳定性：未打开，2-8°C有效期内均可打开后，2-8°C 下： 12 周 上机，20-25°C： 只可使用一次（不可反复冻融）。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准： ⑴试剂批号改变 ⑵根据质控需要进行校准 6.3 校准步骤： 6．3．1校准品的准备：从-20℃冰箱中取出一个分装的校准品，室温放置使其完全溶解，并颠倒混匀备用。 6．3．2起始定标：进入Calibration，点击Status，选择该项目的定标方式（FULL），点击Save，按在Calibration画面下的Installation界面设置好的标准物放置位置装载好相应的定标液，再点Start按键，仪器开始定