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D13生物制药组3实训报告目录一、 实训主要内容：2二、 试剂的配制、培养基的配制31. 试剂的配制32. 培养基的配制33. 醋酸钠-醋酸缓冲液pH44. 1%可溶性淀粉溶液4三、 实验前的准备41. 灭菌42. 23号菌种的培养63. 固体平板培养基的制备7四、 实验内容及操作81. 接种培养82. 活菌数检测83. 酶活检测114. 菌液浊度检测145. 酶蛋白的提取156. 细菌的染色和镜检16五、 数据分析171. 活菌数随培养时间的变化172. 酶活力随培养时间的变化183. 菌液浊度随培养时间的变化184. pH对提取的酶蛋白的变化19六、 实验总结20实训主要内容：活菌数的检测、酶活检测、菌液浊度的检测、酶蛋白的提取组3组员12表1根据实训时间，列出下列表格，以便后续的实验培养时间（h）接种时间取样时间36.24 8:30—9:006.24 12:0066.24 8:30—9:006.24 15:007.56.24 8:30—9:006.24 16:30126.24下午16:30（20:00）（4℃）（30℃）6.25 8:00166.24下午 16:30—17:006.25 8:00186.24下午 16:30—17:006.25 11:00216.24下午 16:30—17:006.25 14:00246.25 9:006.26 9:00276.25 9:006.26 12:00306.25 9:006.26 15:00表格1注：红色标记为未检测项目。试剂的配制、培养基的配制试剂的配制所配的试剂名称所需试剂的质量或体积0.2M醋酸钠母液200ml3.28g0.2M醋酸母液200ml2.299ml2mol/L氢氧化钠溶液500ml40g1%磷酸二氢钾母液250ml2.5g1%七水硫酸亚铁母液250ml2.5g1%硫酸铵母液250ml2.5g0.5%氯化钙母液250ml1.25g0.5%七水硫酸镁母液250ml1.25g表格2由于这些母液上个班配的还没用完，所以也就没再配。培养基的配制组3发酵培养基的配制（V总）150ml试剂所需（ml）/（g）所得终浓度1%磷酸二氢钾15ml0.1%磷酸二氢钾1%七水硫酸亚铁1.5ml0.01%七水硫酸亚铁0.5%氯化钙7.5ml0.025%氯化钙0.5%七水硫酸镁15ml0.05%七水硫酸镁1%硫酸铵15ml0.1%硫酸铵可溶性淀粉2.26g1.5%蛋白胨1.52g1%氯化钠0.79g0.5%牛肉膏0.73g0.5%最终培养基pH值为5.0表格3营养琼脂培养基的配制试剂所需质量营养琼脂培养基16g称取营养琼脂培养基16.08g，加水定容至500ml，煮沸溶解表格4醋酸钠-醋酸缓冲液pHpH0.2M醋酸钠0.2M醋酸4.01.8ml8.2ml5.07.0ml3.0ml6.09.4ml0.6ml表格5 1%可溶性淀粉溶液称取1.24g可溶性淀粉，用约15ml冷的蒸馏水充分溶解混匀，取约70ml沸腾的蒸馏水，将已经混匀的淀粉悬浮液倒入沸水中，边倒边用玻璃棒搅拌，使淀粉溶解。冷却后，用冷的蒸馏水定容到100ml，备用。实验前的准备灭菌将配好的发酵培养基分装于15个规格为100ml锥形瓶，9ml/瓶250ml锥形瓶+150ml蒸馏水5瓶将配好的营养琼脂培养基分装于规格为250ml锥形瓶，2瓶置于高压蒸汽灭菌锅121℃，20min灭菌图三1图三2 23号菌种的培养取23号菌种在超净工作台内进行接种，100ul/瓶，共3瓶，供后续实验菌种的来源。置于摇床中培养30℃，100rmp/min。图三3图三4固体平板培养基的制备取灭好菌的营养琼脂培养基，在超净工作台里倒入平板中，大约15ml/个。供后续检测活菌数使用。图三5图三6注意事项：在配制营养琼脂培养基时，要先加少量水进行溶解搅拌，再加热水进行充分溶解，最后煮沸使琼脂全部溶解，否则琼脂没有溶解就分装，灭菌后就出现上图现象，有的培养基太硬，有的太软。实验内容及操作接种培养根据表2时间表进行接种培养，100ul/瓶，置于摇床30℃，100rmp/min培养。图四1活菌数检测根据表2时间表进行操作，取菌液100ul+900ul无菌水于EP管中进行连续梯度稀释，然后取100ul在平板培养基上进行涂布。放于培养箱中培养，得下表数据。活菌数随培养时间变化表时间（hr）稀释倍数菌数平均值010811×108310709×1061069610822×1087.510678.5×106107112106241.8×108107910853161071275.2×101010823010913318109332.03×101010821024108231.615×10101093027未