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第九章 常见植物组织培养 第一节 蔬菜组织培养 第二节 果树组织培养 第四节 农作物组织培养 第三节 花卉植物组织培养 第一节 蔬菜组织培养 草莓组织培养 大蒜组织培养 草莓组织培养 一、草莓脱毒苗的培育 （一）脱毒技术 （二）脱毒苗的检测 二、草莓无病毒苗的繁殖和利用 1. 防止蚜虫的危害 2.程序及提高繁殖率的措施?? 3.生产管理工作 草莓为重要的浆果植物，草莓属多年生草本植物。用匍匐茎繁殖和分株法繁殖，保持了母本的优良性状，但是长期无性繁殖易积累多种病毒，导致品种退化，产量和品质下降。 草莓经济危害严重的病毒主要有4种：即草莓斑驳病毒（SMYEV）、草莓皱缩病毒（SCrV）、草莓镶嵌病毒(SVBV)和草莓轻型黄边病毒（SMYEV）。这些病毒主要有蚜虫传播引起的。 脱毒技术 1、茎尖培养脱毒 2、热处理和茎尖培养相结合脱毒 3、花药培养 1、茎尖培养脱毒 在匍匐茎发生最多的季节（6~8月），剪取5cm左右的顶梢，剪去叶片，自来水冲洗干净。70%的酒精浸蘸3~5s，0.1%~0.2%的氯化汞或6%~8%的次氯酸钠灭菌2~10min，无菌水冲洗3~4次后，剥去茎尖外面的幼叶和鳞片，露出生长点，切取带有1~2个叶原基（0.3~0.5mm）的茎尖用于接种。 2、热处理和茎尖培养相结合脱毒 （1）材料准备 定植后1~2个月，根系生长健壮的盆栽草莓苗，最好带有成熟的老叶，以增加对高温的抵抗力。 （2）热处理 将盆栽小苗或试管苗放入人工气候箱中，每天在40℃下处理16h，在35℃下处理8h，变温处理4~5周可达到脱毒的目的。草莓植株耐热性差，常用茎尖试管苗进行热处理。 3、花药培养 取材：单核期的花蕾（直径约为4mm），置于内有湿润滤纸的洁净培养皿中保湿，放入3～4℃冰箱中低温保存3～4d后。在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，用无菌水冲洗3次。然后在超净工作台上剥取花药，立即接种。花粉发育时期可采用醋酸洋红压片鉴定，培养基为MS+2，4-D0.4+IAA2。去分化阶段培养条件为24～26℃，光照10h/d，1500lx,20d后可产生乳白色的愈伤组织。 （二）、脱毒苗的检测 检测方法主要有指示植物小叶嫁接鉴定法和电子显微镜鉴定法。 草莓的病毒在通过汁液接种不感染，所以通常采用小叶嫁接法来进行鉴定。 指示植物小叶嫁接鉴定法 首先从被鉴定的草莓采集长成不久的新叶，除去两边的小叶，中央的小叶带1～1.5cm的叶柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物则除去中间的小叶，在叶柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用线把接合部位包扎好。为了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。为保证成活，在2周内，可罩上塑料袋，置于半见光的场所。约经2周时间，撤去塑料袋。若带有病毒，嫁接后1～2个月，在新展开的叶、匍匐茎或老叶上会出现病症。 电子显微镜鉴定法 直接观察草莓细胞器中有无病毒粒子的存在以及病毒颗粒的大小，性状和结构，从而确定草莓组培苗是否完全脱毒。 二、草莓无病毒苗的繁殖和利用 1. 防止蚜虫的危害 由于草莓病毒主要是蚜虫传播的，所以要搞好防蚜虫工作。传播草莓病毒的主要有草莓茎蚜、桃蚜和棉蚜。防治时可使用马拉松乳剂，氧化乐果乳剂等接触杀虫剂，防治期5～6月，9～10月，特别是9～10月一次，可防止蚜虫的越冬。为保证种苗的无病毒，在原种种苗生产阶段，应在隔离网室中进行。采用0.4～0.5mm大小的规格，其中以300号防虫网为好。 2.程序及提高繁殖率的措施??? 草莓无病毒苗的繁殖程序可分五步，包括：脱病毒鉴定生产出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖，生产用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔离室中进行，后一步在露地进行。为提高无病毒母株的繁殖株数可采用赤霉素处理和摘蕾的方法。赤霉素处理用5×10-6的浓度，在5月上旬和6月上旬分两次进行。摘蕾可减轻母株的营养负担，促进匍匐茎的大量发生，田间的每一株可繁殖150～200株。 ? 3． 生产管理工作 注意匍匐茎排列位置，不要交措重叠，这不利采苗，采苗也要适时进行。无论秋季或春季种植，繁殖床必须要进行土壤消毒，防治草莓萎缩病、根腐病、萎凋病等的发生。为促使匍匐茎发生，要经常灌水。 ?大蒜组织培养 大蒜是一种花粉败育的百合科葱属植物，生产用种主要靠无性繁殖，由于病毒侵染，传代等导致大蒜品种老化、退化严重，产量和商品性状降低，给生产造成很大损失。 大蒜病毒主要有：大蒜花叶病毒（GMV）、大蒜潜隐病毒（GLV）、洋葱黄矮病毒（OYDV）和大蒜退绿条斑病