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灭菌法可分为三大类：物理灭菌、化学灭菌、无菌操作法。 （1）干热空气灭菌：用干热空气使微生物细胞发生氧化、体内蛋白质变性达到杀灭杂菌的目的。对培养器具（试管、培养皿等）或移液管等进行灭菌，通常采用干热灭菌箱。 （2）湿热灭菌 利用饱和蒸汽灭菌的方法。湿法灭菌常用于大量培养基、设备、管路及阀门的灭菌。 （3）过滤除菌：用过滤的方法阻留微生物达到除菌。对空气进行除菌，用过滤器。 （4）电磁波、射线灭菌：产生的高能粒子进行灭菌，紫外线最常用，穿透能力低，只能用于表面灭菌。在发酵生产中，紫外线主要用于无菌室、培养间等空间的灭菌。通常采用紫外灯进行灭菌。 辐射灭菌法 辐射灭菌是应用射线灭菌的方法，目前应用的有穿透力较强的γ射线和穿透力较弱的β射线 其优点在于：① 价格便宜，节约能源；② 可在常温下进行，不破坏被辐射的挥发性成分，适合热敏材料的消毒、灭菌，这也是辐射灭菌的最大特点；③穿透力强，在包装条件下也可以灭菌；④ 速度快，操作简便，便于连续作业 (一)射线种类 γ射线是由钴-60或铯-137发出的电磁波，不带电荷即穿透力很强的光子，适用于较厚样品的灭菌，可用于密封安瓿和和整瓶药物的灭菌，还可以穿透包装进行灭菌 β射线是由电子加速器产生的高速电子流，带负电荷，穿透力较弱，通常仅用于非常薄和密度低的物质的灭菌，在物质的比重为1，不计容器壁的比重和厚度时，它平均只能穿透层后约2cm的物质，比γ射线的灭菌效果差 (二)辐射灭菌的机制 ⑴ 直接电离作用 射线可使微生物体内蛋白质、核酸等有机大分子化合物的分子直接发生电离，产生破坏正常代谢的自由基。 ⑵ 直接激发作用 射线除了能促使分子电离以外，也能激发各种复杂的生物大分子，使其结构产生一系列化学变化，继而扰乱正常的代谢过程。 紫外线灭菌法 紫外线由汞蒸汽灯产生，波长为200～300nm，其中波长在253.7nm的紫外线杀菌作用最强，是近紫外线（300～400nm）的数千倍至数万倍 紫外线杀灭细菌的机制是，经紫外线照射后，细菌细胞内脱氧核糖核酸的胸腺嘧啶成为二聚体而失去活性 根据紫外线的特性，目前紫外线杀菌应用于：空气灭菌、水中灭菌及固体表面直接照射灭菌 化学灭菌法 环氧乙烷 在室温下无色，沸点10.8℃，沸点以下为无色透明液体；在水中溶解度很大，1ml水中可溶195ml；有较强的扩散和穿透力，作用快；对细菌芽胞、真菌、病毒等各种微生物均有杀灭作用，属于广谱杀菌剂 环氧乙烷属烷化剂，细菌蛋白质分子、酶、核酸中的氨基、羟基、羧基与环氧乙烷相结合，对菌体细胞的代谢产生不可逆的破坏 应用范围 可用于对热敏感的固体药物、塑料容器、注射器、皮革制品、手术器械等 灭菌机制 环氧乙烷灭菌的注意事项 环氧乙烷具可燃性，当与空气混合后空气含量达3.0％（V/V）时即可爆炸。故应用时需用惰性气体二氧化碳或卤代烃稀释 环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和力强，故灭菌完毕后需通洁净空气12～24h驱除残余气体。 影响环氧乙烷灭菌效果的因素 环氧乙烷的浓度大，灭菌所需的时间短。如浓度为850～900mg/L（45℃），灭菌时间为3h；浓度为450mg/L，灭菌时间为5～6h 灭菌温度如果低于最佳温度50～55℃，则灭菌效果差 相对湿度30％～60％为宜，50％最佳，小于20％大于80％则灭菌效果减弱，RH在25％以下对芽胞不起作用 灭菌器内压力较大则灭菌效果较好 各种微生物对环氧乙烷的敏感性不同，最敏感的是酵母菌、真菌，最差的是芽胞 常用的消毒剂 酚类：对细菌的细胞壁和细胞质膜有损害作用，使菌体内成分漏出，蛋白质变性，也可抑制某些酶系统。苯酚常用0.5～3％，甲苯酚常用2～5％ 醇类：能使菌体蛋白质变性。常用70％～90％的乙醇 醛类：甲醛 烷基化合物：常用环氧乙烷 二、过滤灭菌法 过滤灭菌法是使药液通过无菌的滤器除去活的或死的微生物而得到不含微生物的滤液 。 (一)过滤灭菌法的特点 适于不耐热药物的溶液，可以减少药液中的热原但不能破坏热原 加压过滤用的较多 室温下易挥发、易氧化的药物宜用加压过滤法 过滤灭菌法应配合无菌操作技术进行 (二)过滤灭菌常用的滤器与滤材 ⑴ 硅藻土滤柱 由硅藻土及有机粘合剂等物混合，在1200℃高温下烧制而成。滤孔为3～4μm的细号滤柱可滤除溶液中的颗粒杂质和一部分细菌 ⑵ 白陶土滤器 由白陶土及细砂混合，经高温烧结而成，为瓷制品，孔径1.3μm以下的可滤除细菌 ⑶ 垂熔玻璃滤器 硬质中性玻璃粉加高温至接近其熔点熔合而成均匀孔径的滤板，然后再把滤板粘连于不同的玻璃器内制成。孔径为1.5～2μm的6号滤器可以滤除细菌但不能滤除芽胞 ⑷ 多孔聚乙烯 简称多孔PE，是将聚