5植物细胞工程制药解读.ppt

植物细胞工程：以植物组织细胞为基本单位，在细胞或细胞器水平上应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物个体，或获得有用物质的过程。 它是在植物组织培养的基础上发展起来的，因此植物细胞工程也是广义概念上的植物组织培养。 第三节 植物细胞的形态及生理特性 一、植物细胞的形态 二、植物细胞的结构特征 1.生理活性物质 一类对细胞内的生化反应和生理活动起调节作用的物质的总称，包括酶、维生素、植物激素、抗生素和植物杀菌素等。 2.后含物 植物细胞储藏的物质或者废弃物质，包括生物碱、苷类、有机酸、挥发油等。 第四节 植物细胞培养的基本技术 2.外植体的灭菌 消毒原则：既要彻底消灭外植体表面的微生物，又要保持外植体正常活力。 消毒剂：良好的消毒作用，又要易被无菌水冲掉或自行分解掉。 消毒程序：消毒剂种类、浓度和消毒时间。 目前常用消毒方法： 首先70～75％酒精，30秒，表面杀菌，后用其他消毒剂消毒；如： 0.1％升汞，5～10分钟，2～5％次氯酸钠，5～30分钟。 茎尖、茎段、叶片消毒程序： 70％乙醇30秒 → 无菌水2～3次 →2～5％次氯酸钠10～15分 → 无菌水3～5次。 种子的消毒程序： 10％次氯酸钠20～30分→无菌水3～5次。 根的消毒程序： 自来水冲洗→纯乙醇漂洗→0.1％升汞5～10分→无菌水3～5次。 3.诱导培养 （1）外植体的切割： 叶片0.5～0.8 cm2；茎段和顶芽以１cm长为宜。 （2）接种： 形态学下端插入培养基（如茎切段），叶平铺。不可将切块深埋于培养基中，以防无氧呼吸。 （3）最佳培养基的筛选： 主要因素: 基本培养基，植物生长物质的种类、浓度和配比。 二、培养基及其组成 1.培养基的种类 （1）基本培养基：包括大量元素和微量元素、维生素和氨基酸，还有碳源和水。常见的有MS、White、Nitsch、B5和N6等。 完全培养基：根据各种不同试验要求，在基本培养基中附加一些物质，如各种植物生长物质以及其它有机附加物（如椰乳、香蕉汁、番茄汁、酵母提取物、麦芽等）。 （2）根据培养基的物理状态分： 液体培养基和固体培养基 （3）根据培养基的无机盐分： 高盐(MS)、中盐(Miller)、低盐(White)培养基 （4）根据培养物分： 愈伤组织培养基、芽增殖培养基、生根培养基、细胞培养基和原生质体培养基等 2.培养基的组分 （1）无机营养成分： 植物生长发育必需的元素为14种： 大量元素 N、P、 K、Ca、S、Mg（大于30mg/L） 微量元素 Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni（小于30mg/L） （2）有机营养成分： A 碳源：为生长发育提供碳骨架和能源，维持培养基的渗透平衡。主要为糖类，常用蔗糖。一般用量为2～5%。 B 有机N源：构成蛋白质和核酸等生物大分子的组成分，并提供激素。如蛋白质水解产物、氨基酸和有机复合物。 （3）植物生长物质： A 生长素：主要用于诱导细胞的分裂（愈伤组织的形成）和根的分化，如IAA，NAA，IBA，2,4－D。 B 细胞分裂素：主要用于促进细胞分裂和由愈伤或器官上分化不定芽，也用于茎芽增殖，常用6-BA、KT、ZT。 （4）琼脂与pH值： 琼脂是由海藻得来的多糖类物质，一般用0.7～1.0％。 pH一般为5～7间，常用 5.8。pH 6.0，培养基变硬；pH 5.0，琼脂不凝固。 （5）维生素： 植物细胞通常是维生素自养型，但合成量太少，需要额外加入少量的维生素。 3.培养基的制备 （1）母液的配制和保存： 培养基母液是指按培养基配方配制浓度高10~100倍的高浓度溶液。 （2）配制培养基： 100ml大量元素 + 10ml微量元素 + 10ml铁盐+ 10ml有机物 + 生长物质 + 30g蔗糖 + 7g琼脂，定容1L，煮沸溶解后灭菌备用。 灭菌后的培养基一般隔天再用，因pH变动（偏酸0.1~0.3 pH ）。 培养基在低温暗中可保存一段时间（1个月）。 三、培养方法 按培养对象分：原生质体培养和单倍体细胞培养； 按培养基类型分：固体培养和液体培养； 按培养方式分：悬浮细胞培养和固定化细胞培养。 1.植物细胞培养所需要的营养物质有哪些？ 2.植物细胞培养的基本技术有哪些？ 悬浮培养举例 在愈伤组织液体培养的基础上发展起来。是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 1.悬浮培养的特点： （