植物细胞工程-愈伤组织技巧.pptVIP

第五章 愈伤组织培养 愈伤组织 是在离体培养条件下，经植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的组织 。经一段时间的生长和增殖以后，在其内部出现一定程度的分化，产生出一些具有分生组织结构的细胞团、色素细胞或管状分子。在离体条件下，植物细胞全能性的表达，是使细胞发生分裂形成愈伤组织而实现的。 第一节 导论 愈伤组织 植物的任何部分在适宜的离体培养条件下，都可以诱导出愈伤组织，但获得的愈伤组织的质量、繁殖速度快慢、诱导愈伤组织发生时间的长短和愈伤组织的类型有差异。 根据研究的需要，人们期望有针对性地对愈伤组织的诱导进行调控。因此，了解和掌握愈伤组织诱导与形成特点及形态建成方式与调控规律，才能充分发挥愈伤组织用途。 第二节 诱导与继代培养 自然界中常看到的一些植物，受到机械创伤后其韧皮部附近的细胞分裂形成突起的“疤”或“瘤”就是愈伤组织，这种创伤组织的概念后被引入生物技术领域。 生物技术中的愈伤组织是在离体培养条件下，经植物脱分化和不断增殖形成的无特定结构的组织。经过一段时间的生长和增殖后，在其内部出现一定程度的分化，产生一些具有分生组织结构的细胞团、色素细胞或管状分子。 植物愈伤组织的形成结构 根据愈伤组织的性质和细胞组成的特点，可以将它们的结构分为致密和松散两种类型。 松散型 致密型 愈伤组织形成 诱导期 分裂期 分化期 改变原来的分化方向和代谢方式，合成代谢加强，合成大量蛋白质和核酸物质为细胞的分裂和增殖奠定基础 外植体外层细胞开始分裂，细胞脱分化，愈伤组织结构疏松，缺少组织结构，颜色浅而透明 Callus表层细胞分裂逐渐停止，而转向其内部的局部地区，并改变分裂面的方向，出现瘤状结构外表，Callus中可以发现维管组织，但不形成维管系统 愈伤组织形成的过程 愈伤组织诱导形成过程 小麦幼胚 分裂期 诱导期 分裂期 分化期 分化期 继代培养 1、继代培养与周期 愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养，即继代培养。 愈伤组织由原来的培养基上转移到新鲜的培养基上3~7天即可恢复生长，随后2~3周内生长达到高峰，愈伤组织的细胞分裂处于最活跃时期。 由于代谢产物的积累会产生毒害作用，如果长时间不继代培养。就会使愈伤组织变成黑褐色，继而死亡。 用继代培养维持愈伤组织生长，是长期保存愈伤组织的一种方法。 一般来说，愈伤组织的增殖生长只发生在不与琼脂接触的表面。而与琼脂接触的一面极少细胞增殖，只是细胞分化形成紧密的组织块。因此，由于愈伤组织的迅速增殖，整个愈伤组织小方块变成了一个不规则的馒头状的组织块。 它是愈伤组织表面或近表面瘤状物生长的结果。 2、继代时间与遗传稳定性 愈伤组织长期继代培养会出现遗传上的不稳定性和变异性，使染色体发生倍性和结构上的改变及分子水平上的。由其诱导产生的再生植株，也会相应产生遗传上与用于培养的原始亲本不同的遗传变异和遗传组成的不一致性。 愈伤组织遗传上的不稳定性因基因型、外植体、培养基成分和培养时间的不同而异。 1）形态发生 形态建成：外植体在适宜的培养条件下经过脱分化和再分化形成完整植株的过程。 在组织培养中，从外植体形成器官或无性系的形态发生，有下面两种方式： 第三节 形态建成与调控 形态发生方式（一） 不定芽方式 指愈伤组织通过再分化形成不定芽再生植株。这是组织培养中常见的器官发生方式。 愈伤组织的器官发生顺序有三种情况： （1）先形成芽，再在芽的基部长出根形成小植物 （2）先产生根。再从根的基部分化出芽形成小植株； （3）仅单独分化根或芽，即无根的芽或无芽的根 无根苗 形成有根苗 ① ② ③ ④ ⑤ 形态发生方式（二） 胚状体方式 指由培养细胞诱导分化出的胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。 Development of organs(roots, shoots, etc.) or embryos (embryo-like structures) 2）调 控 影响因子： （一）外植体本身 （二）培养基 （三）培养环境 （一）外植体本身 1．遗传型　材料的基因型对愈伤组织的器官分化有决定性的影响。 2．器官和部位　对有些植物而言，不同的器官或组织所形成的愈伤组织，在生理上或形态上存在明显差异。 3．年龄　年龄较幼的外植体，不仅易于诱导形成愈伤组织，而且也容易诱导分化成植株。 （二）培养基 1 生长调节剂 细胞分裂素/生长素的比例 是控制芽和根形成的重要条件之一。细胞分裂素/生长素比例高时有利于芽形成；而这一比例低时，有利于根的形成。 2 无机营养元素　 营养元素的缺失会导致愈伤组织生长不良，如： 　缺铁：细胞分裂停