【2017年整理】常用生化试剂作用.docVIP

常用生化试剂作用： ? 蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。3、IPTG：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是，IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。6、DMSO：二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40。8、NP-40：很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂，也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。?11、TEMED：四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下，加入TEMED可加速凝胶聚合。12、巯基乙醇：一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保持溶解状态，有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。13、甲叉双丙烯酰胺：N，N-甲叉双丙烯酰胺，别名MBA，又叫亚甲基双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N，N-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。14、过硫酸铵：过硫酸铵（APS）的作用主要是提供自由基，然后在促凝剂TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。15、B27：一种添加剂，用于神经肝细胞培养，被认为具有抑制胶质细胞生长的作用。16、DTT：二硫苏糖醇，常用还原剂，既有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。又是一种蛋白质变性剂，破坏二硫键，浓度不同，起到的作用也不同。17、弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。18、吐温 20：Tween-20 ，常用的非离子去垢剂。19、吐温 80：weenum 80 ，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶药物的增溶剂。20.、十二烷基肌氨酸钠?：脱细胞试剂，制备脱细胞组织工程支架材料。 PVPP：PVPP对片剂具有崩解作用，能和各种不溶于水的药物共容，能稳定化各种悬浮剂，又具有形成络合物的能力以及吸附作用等，因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。 PIPES：哌嗪-N，N-二（2-乙磺酸）,实验室做缓冲剂用。全名是哌嗪-N,N-二（2-乙磺酸），pKa是6.80。不参与也不干扰生物化学反应，价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中，PIPES有时还被用来制备大肠杆菌感受态。 CTAB：十六烷基三乙基溴化铵，一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3