【2017年整理】微生物检测培养基原理.docxVIP

微生物检测培养基及试剂原理1.细菌与培养有关的生理结构。细胞壁（cell wall）主要成分：肽聚糖革兰氏阳性菌（G+）:细胞壁有15-50层肽聚糖，厚20-80nm，组成三维立体框架，结构坚固致密。革兰氏染色紫色。革兰氏阴性菌（G-）:细胞壁有1-2层肽聚糖，厚10-15nm，不能形成三维结构。但在肽聚糖之外，有G-特有的结构-外膜。革兰氏染色红色。细胞膜（cell membrance）细胞膜位于细胞壁内侧，紧包住细胞质，结构为平行的磷脂双分子层，其中镶嵌有多重蛋白质，大多为酶类和载体蛋白。功能：物质转运 呼吸 分泌 生物合成胞质周围间隙：G-菌的细胞膜与细胞壁之间的空间。此处聚集了若干种胞外酶，主要是水解酶。细胞质（cytoplasm）细胞质的主要成分是水、蛋白质、核酸、糖、无机盐等。细胞质含有多种酶系统，是细菌合成蛋白质和RNA的场所。细菌的分解代谢和合成代谢都在胞质中进行。核蛋白体核蛋白体是细菌合成蛋白质的场所。链霉素能与细菌核蛋白体的30s亚基结合；红霉素能与50s亚基结合，干扰细菌的蛋白质合成，从而杀灭细菌。细菌的物理性状细菌虽小，也有独立的生命活动。能从外界环境中摄取营养原料，获得能量，合成菌体自身成分。同时排出废物，完成新陈代谢，从而得以生长繁殖。-表面积 葡萄球菌直径约1um，则每立方厘米的表面积可达60000cm2. 一般生物体直径约1cm，则每立方厘米体积的表面积只有6cm2.-带电现象 PHPI(带负电) PH=PI PHPI(带正电) G+菌 PI=PH(2-3) G-菌 PI=PH(4-5)-光学性质 细菌为半透明体，光线不能完全通过，故悬液呈浑浊状，均量越大浊度越大。-细菌的物理性状 细菌的细胞壁和细胞膜都为半透性。 细菌的渗透压比其它生物细胞为高。3.细菌生长繁殖的营养物质和环境条件 自营菌：能以简单的无机物为原料，合成复杂的菌体原生质。 异营菌：必须供给多种有机物质，才能合成菌体原生质。所有的病原菌都是异养菌。营养物质 水：（细菌80%，酵母菌75%，霉菌85%，霉菌孢子39%，细菌芽胞核心部分的含水量=30%）细菌代谢过程中的一切反应都必须有水才能进行。培养基用水应为纯水（蒸留水，去离子水）。电导率—0. 碳源（约占干重50%）：碳源是细菌合成菌体成分和获得能源的主要来源。 培养基碳源的供应主要来自糖类（C.H.O）、有机酸、醇类和脂类。 氮源（约占细胞干重的12%-15%）:构成重要生命物质蛋白质和核酸等的主要元素。氨基酸异养型-需从外界吸收现成的氨基酸作为氮源；培养基中的氮源主要来自蛋白胨、氨基酸以及动、植物组织浸出液。氨基酸自养型-能把尿素、铵盐、硝酸盐甚至氮气等简单氮源自行合成所要的氨基酸菌体蛋白（SCP或食用菌）无机盐：参与构成菌体成分：调节细胞内外渗透压：与酶活性有关。其中P、K、Na、Mg、S、Fe等需要量较多（K2HPO4、MgSO4）；Cl、Mn、Zn、Co、Cu等只需微量。生长因子：许多细菌的生长还必需一些其自身不能合成的生长因子，主要是B族维生素（硫胺素VB1,核黄素VB2，泛酸VB3，吡哆素VB6,烟酸VB5，对氨基苯甲酸PABA）和某些氨基酸、嘌呤、嘧啶。 细菌摄取营养的机理：单纯扩散 被动吸收促进扩散（细胞膜上的特异性载体蛋白/渗透酶）主动吸收（耗能，通过膜上载体蛋白）基团转位（耗能，通过膜上载体蛋白，运送前后溶质分子改变）环境条件：PH值：大多数细菌生长最适酸碱度为中性或弱碱性即PH7.2-7.6。在此PH时，细菌的酶活性最强。考虑培养基成分对PH的调节能力（PH的内源）。1.1借助磷酸盐缓冲溶液（K2HPO4和KH2PO4）1.2 以CaCO3作“备用碱”进行调节。2.渗透压（由溶液中所含的分子或离子的数量决定）与细胞渗透压相等的等渗溶液最适宜微生物的生长，高渗透溶液则会使细胞发生质壁分离低渗溶液则会使细胞吸水膨胀，形成很高的膨压。水活度（aw）：表示微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。氧（氧化还原电势）：需氧菌利用分子氧作为最后受氢体以完成呼吸作用。厌氧菌则在无氧环境中才能生长。.二氧化碳：一般细菌在代谢过程中都需要CO2.温度：细菌生长的温度极限为-7_90度。病原菌最适生长温度为人体温度37±2℃.细菌分类检测原理革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病。而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。培养基中各种抑菌物质对革兰氏阴性，阳性细菌的不同影响。各种细菌发酵糖类物质的不同结果。产酸产气/产酸不产气/不产酸不产气对相应物质的代谢产物不同，各种生化鉴定。5. 分离与鉴定培养基中相关物质的作用