【2017年整理】微生物的观察技术.docVIP

微生物的观察技术 一、微生物大小的测定 目的要求 学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法 增强微生物细胞大小的感性认识 基本原理 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。 由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。 用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺(图Ⅳ-1-c)是一块圆形玻片，其中央刻有精确等分的刻度，有把5毫米刻成为50等分或把10毫米长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同的显微镜放大倍数不同，同一显微镜在不同的目镜、物镜组合下，其放大倍数也不相同，而目镜测微尺是处在目镜的隔板上，每格实际表示的长度不随显微镜的总放大倍数的放大而放大，仅与目镜的放大倍数有关，只要目镜不变，它就是定值。 而显微镜下的细胞物象是经过了物镜、目镜两次放大成象后才进入视野的。即目镜测微尺上刻度的放大比例与显微镜下细胞的放大比例不同，只是代表相对长度，所以使用前须用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求得在一定放大倍数下实际测量时的每格长度。 器材 菌种 仪器或其他用具 目镜测微尺,镜台测微尺,载玻片,盖玻片,显微镜等. 操作步骤 镜台测微尺置于载物台上，使刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器、使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10微米，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度： 例如目镜测微尺10小格等于血球计数板2小格，已知血球计数板每小格为10微米则2小格的长度为2×10微米＝20微米，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为： 同法校正在高倍镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 菌体大小的测定 先在低倍镜下找到目的物，然后在油镜下转动目镜测微尺，测出苏云金芽孢杆菌菌体的长、宽各占几格(不足一格的部分估计到小数点后一位数)，测出的格数乘上目镜测微尺每格的长度，即等于该菌的大小。 一般测量菌的大小要在同一个涂片上测定10-20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小，而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。 注意事项 当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 观察a name=baidusnap0/a时光/B线不宜过强,否则难以找到镜台微尺的刻度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分细心,防止接物镜压坏镜台微尺和损坏镜头.? 二、微生物数量测定 微生物计数法 直接计数法 稀释平板测数法 光电比浊计数法 电子计数器计数法 活细胞计数法　 测定细胞重量法 测定细胞总氮量或总碳量? 颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU） 显微镜直接计数法 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法，该方法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液。 目的要求 了解血球计数板的构造； 计数原理和计数方法； 掌握显微镜下直接计数的技能。 常用计菌器 常用计数器有血球计数板、Petrof Hausser细菌计菌器以及Hawksley计菌器。 两种计数板的原理和部件相同，只是血球计数板较厚，盖玻片和载玻片之间的距离较大，达0.1mm,不能使用油镜观察，只能计数较大的霉菌孢子和酵母菌；而后两种计菌器细菌，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02,可以使用油镜观察，因此可以直接计数细菌。 血球计数板结构 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每半上面各有一个平台。 每个平台上刻有方格网，每个方格网分成9个大方格，中间的大方格就是计数区。 计数区 计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格； 另一种是一个计数区分成25个中方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。 不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区容积 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，计数区的高度为0.1mm，盖上盖玻片后每个计数区的体积为0.1mm3。 每个小方格的面积为1/400mm2。每个小方格的体积为1/4000mm3。 计数方法 使用血球计数板计数时，通常数5个中方格中的总菌数A，然后求每个中方格的平均值，再乘上大方格中中方格的数量，就得出一个大方格中的总菌数，再换算成每毫升菌液中微生物细胞的数量。 计算： 1mL菌液中总