【2017年整理】摘要 环境胁迫植物细胞中积累大量的活性氧.docxVIP

植物ROS清楚系统基因研究 摘要 环境胁迫植物细胞中积累大量的活性氧，从而导致蛋白质、膜脂、DNA及其它细胞组分的严重损伤。植物体内有效清除活性氧的保护机制分为酶促和非酶促两类。酶促脱毒系统包括超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)等。非酶类抗氧剂包括抗坏血酸、谷胱甘肽、甘露醇和类黄酮。利用基因工程策略这些物质在植物体内的含量，从而获得耐逆转基因植物已取得一定的进展。本文将主要介绍植物SOD、APX、CAT、GR的酶学性质和基因工程方面的研究进展。 关键词： 活性氧，氧化损伤，酶促脱毒系统，基因工程 非生物胁迫在植物体内产生一系列的生理生化代谢反应，使植物的生长和发育受到影响，从而表现出不利的表型性状。其中最主要的危害之一就是在生物体内产生大量的活性氧，过量的活性氧对生物体能产生不同程度的危害，为了消除或降低这种危害，植物体内存在着抗氧化保护酶系统和非酶系统，使植物体内活性氧含量处于一个平衡状态而免于受到氧化胁迫伤害。因此，通过降低植物逆境状态下的活性氧水平，可以减少逆境对植物产生的危害。 下图是活性氧的产生途径以及还原途径： 植物抗氧化系统 需氧生物在进化过程中为保护自身免受AOS的伤害形成了内源保护系统,由非酶抗氧化剂和抗氧化酶类组成。在正常新陈代谢过程中,抗氧化系统可保持活性氧之间的平衡从而维持细胞的正常生理功能,但在胁迫条件下,活性氧在短时间内的大量激增常常超出了内源清除系统的解毒能力,造成对生物体的伤害。植物非酶抗氧化剂有谷胱甘肽、氢醌、甘露醇、维生素C和E、B-胡萝卜素、生物碱等有机小分子。目前在植物中已发现的抗氧化酶类包括超氧物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)等,它们主要存在于叶绿体和胞浆中,形成高效的抗坏血酸-谷胱甘肽循环。 活性氧的酶促脱毒系统中相应的酶 1.1 超氧化物歧化酶（SOD） SOD作为植物抗氧化系统的第一道防线，清除细胞中多余的超氧根阴离子。在高等植物中，SOD根据其辅基部位结合的不同金属离子分为3类：Mn-SOD、Fe-SOD、Cu/Zn-SOD[5]。对SOD基因家族的深入研究是在玉米中进行的。已得到的序列分析表明，广泛存在于真核生物中的Cu/Zn-SOD与Fe-SOD和Mn-SOD不同源。 2.2 抗坏血酸过氧化物酶(APX) ??? APX是清除H2O2的主要酶类，根据其在植物细胞中的定位分为4类：类囊体APX、微体APX和细胞质APX。APX催化H2O2还原的化学反应如下：2抗坏血酸+H2O2→2单脱氢抗坏血酸+H2O[32]。产生的单脱氢抗坏血酸可通过不同的途径被还原。 2.3 过氧化氢酶（GAT） 过氧化氢酶主要存在于植物过氧化物酶体与乙醛酸循环体中，它与APX一样都是清除H2O2的主要酶类。过氧化氢酶可催化如下反应：2H2O2→O2+2H2O。它与APX的不同之处在于：前者不需要还原力且具有较高的酶活速率，但对H2O2的亲和力较弱，后者需要还原性底物，并对H2O2具有较高的亲和力。 3. 活性氧的非酶促清除及相关分子 3.1 抗坏血酸和谷胱甘肽 抗坏血酸和谷胱甘肽在活性氧脱毒过程中起重要作用，它们可直接同ROS反应，将其还原，又可作为酶的底物在活性氧的清除过程中扮演重要角色。抗坏血酸、还原型谷胱甘肽及APX、GR、SOD和MDHAR都参与了植物细胞中抗氧化剂的再生过程。 3.2 甘露醇 甘露醇是已知的氢氧根离子清除剂。在氧化胁迫下，甘露醇可以保护巯基酶类或其他巯基调控的叶绿体组分，如黄素蛋白、硫氧还原蛋白和谷胱甘肽。这可通过离体类囊体实验证明：在适当浓度的还原态金属离子存在下，离体类囊体可以产生OH-，磷酸核酮糖激酶（PRK）作为卡尔文循环中巯基酶类的代表可与产生的OH-发生作用，然后分别加入甘露醇、甲酸内、过氧化氢酶，通过检测PRK的活性来验证它们对OH-的清除能力。 3.3 类黄酮 最近研究发现类黄酮与抗坏血酸和α-生育酚一样，是主要的活性氧清除剂。体外研究表明类黄酮可以直接清除活性氧，如超氧化物（O2-）、氧化氢（H2O2）、氢氧根离子（OH-）或单氧（O2）[34]。但在体内却未必如此，因为类黄酮主要定位于液泡，而活性氧离子并不能从叶绿体扩散至液泡中，因而在植物细胞中，类黄酮只能在活性氧的产生部位或附近部位进行清除，如液泡或细胞壁。而H2O2却比较稳定而且能够穿过生物膜，故而类黄酮在H2O2的清除中扮演极为重要的角色。 　利用氧化代谢基因工程提高植物抗逆性的研究进展 生理学研究表明,抗氧化酶类是植物抵抗氧化胁迫的关键因素。其主要依据有:逆境胁迫引起抗氧化酶活性增加,且增加的酶活性与耐性直接相关;用一种胁迫对植物预处理可产生对其它不同胁迫的交叉耐性。因此,为提高植物抗