N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明.docVIP

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书 (酶法·液体双试剂) 用 途 本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。 原 理 在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应，生成绿色色素。通过测定此色素可求得NAG的活力。 第一反应： HK 葡萄糖 + ATP ─────────→ 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 第二反应： NAG PNP-NAG + H2O ──────→ N-乙酰氨基葡萄糖 + p-硝基苯酚 NAGOD N-乙酰氨基葡萄糖 + O2 + H2O ───→ N-乙酰氨基葡萄糖酸 + H2O2 POD H2O2 + BCMA + H+ ────→ 绿色色素 + 2H2O 试 剂 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 试 剂 成 份 含 量 ────────────────────────────────── R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/L POD ≥12500U/L HK ≥8000U/L ATP·2Na ≥5mg/ml R-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/L R-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L ────────────────────────────────── R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/L R-2B MES 30mmol/L ────────────────────────────────── 标准酶 NAG 约为50U/L 标准酶溶解液 MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 标 本 尿液 试剂配制 R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。溶解后，低温避光保存(2-8℃)可稳定二周。 R-2：以一瓶R-2B溶解一瓶R-2A。溶解后，低温避光保存(2-8℃)可稳定二周。 标准酶溶液：吸取5.00ml标准酶溶解液溶解一瓶标准酶。 测定方法 分析方法：速率A；主波长：750nm；副波长：600nm（可不用）；样品量：4.0ul；R-1：240ul，R-2：120ul；校准方式：线性；反应方向：上升；测定温度：37℃。 样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟157秒，测定125秒。 样品 4.0ul 主波长750nm R-1 240ul R-2 120ul 副波长600nm 测光 测光 0 5 7 10min 计 算 ΔAs/min NAG(U/L) = ━━━━━━×标准酶标示值 ΔAstd/min ΔAs/min = 测定管的吸光度变化量 ΔAstd/mi