【2017年整理】分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量.docVIP

分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量 容蓉1* 陈明强1 杨勇2 张发科1 李洪晓1（1 山东中医药大学天然药物省重点实验室；2 山东中医药大学分子与细胞生物学实验室，山东济南 250014） 复方天麻颗粒用于治疗传出神经功能紊乱引起的头晕目眩、精神疲惫、神经衰弱等疾病。甘油磷酸钠为处方中加入的补磷药。磷参与骨质的形成，以磷脂形式参与细胞膜的组成，同时磷与许多代谢中的酶活性有关，在能量代谢中的作用至关重要β—甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P·5H2O，Fluka公司，批号50020)；磷酸二氢钾（中国药品生物制品检定所，批号100745-200401）；水为去离子水；其余试剂均为分析纯。 1.2 试验方法 1.2.1 溶液的制备 供试品溶液的制备 取批号为050422的复方天麻颗粒，研细，取约2 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，静置。精密量取上清液5 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品N溶液。另精密量取上清液6 ml置盛有1g氧化锌粉末的坩锅中,混匀,置水浴上蒸干(蒸干前轻轻晃动坩埚，使其混合均匀)后,置电炉上炭化，在600℃炽灼1 h，ml，加热煮沸溶解，转移至100 ml量瓶中，，，105℃干燥2 h的磷酸二氢钾136.09 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，，，β-甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P·5H2O)置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为β-甘油磷酸钠对照品溶液。 1.2.2 测定方法 分别精密量取磷酸二氢钾工作对照品溶液及供试品M、N溶液各5 ml置25 ml量瓶中,加钼酸铵[称取钼酸铵5 g，加5%（g/ml）硫酸溶液溶解，并稀释至100 ml]1 ml与0.5%对苯二酚[称取对苯二酚0.5 g，加0.25%（g/ml）硫酸溶液溶解，并稀释至100 ml；临用新制]1 ml。再加50%醋酸钠溶液3 ml，并用水稀释至刻度，摇匀。另取水5 ml置25 ml量瓶中，同法处理,所得的溶液为空白参比溶液。在400～900 nm 扫描,对照品溶液与供试品溶液在716 nm处有最大吸收,故选择716 nm作为测定波长。照分光光度法[1]，在716 nm的波长处迅速测定显色后的对照品溶液、供试品M、N溶液及阴性对照M、N溶液的吸光度，计算磷含量。 1.3 方法学试验 1.3.1 线性关系考察 精密量取磷酸二氢钾储备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0，分别置50 ml量瓶中,加水稀释至刻度。按1.2.2项下方法试验,以磷的浓度(C，μgml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,进行线性回归，得到回归方程为：C = -0.002 + 0.113A，相关系数r = 0.9998。结果表明，磷在0.6～8.7 μg/ml范围内线性关系良好。 1.3.2 精密度试验 取磷酸二氢钾工作对照品溶液,按1.2.2项下的方法进行6次试验,测得吸光度的RSD = 0.3%。结果表明，试验精密度良好。 1.3.3 稳定性试验 取磷酸二氢钾工作对照品溶液,按1.2.2项下的方法进行试验,显色后于不同的时间点测定吸光度。试验表明，在室温条件下，吸光度(A)在30 min内基本稳定，放置45 min后吸光度的降低达3.0%，故显色后应迅速测定溶液的吸光度。 1.3.4 重复性试验 复方天麻颗粒（批号050422）研细，取约2 g，按1.2.1项下方法制备供试品溶液，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，平行测定6份，测得甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P)的量分别为23.8、25.2、23.6、24.7、25.2、24.4 mg/g，平均24.5 mg/g，RSD为2.8%，结果表明，该试验操作重复性好，符合要求。 1.3.5 回收率试验 取不含甘油磷酸钠的阴性样品约2 g,精密称定，分别加入6、5、4 ml的β-甘油磷酸钠(C3H7Na2 O6P·5H2O，相当于标示量的120%、100%和80%)，按1.2.1项下方法制备供试品溶液，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，求得平均回收率为100.4%，RSD为2.5%，结果见表1。 结果表明，该试验方法测定甘油磷酸钠含量准确度合格。 1.4甘油磷酸钠的含量测定结果 取复方天麻颗粒十批，按1.2.1项下方法制备供试品溶液，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，结果见表2。 结果表明，本品中甘油磷酸钠（C3H7Na2O6P）含量以有机磷计，为22.8～25.0 mg/g。 2 讨论 采用灼烧法对样品中的甘油磷酸钠进行有机破坏,定量生成磷酸盐,磷酸盐与显色试剂作用生成深蓝色的溶液，在可见光区有良好的线性吸收，故可用可见分光光度法测定溶液中的磷含量。以市售进口的β-甘油