【2017年整理】厄贝沙坦平衡透析法.docVIP

厄贝沙坦平衡透析法 [关键词] 厄贝沙坦；血浆蛋白结合率；平衡透析法；hplc [key words] irbesartan; human plasma protein binding rate; equilibrium dialysis; hplc 厄贝沙坦是血管紧张素ⅱ受体拮抗剂，能特异性地拮抗血管紧张素ⅱ受体，通过特异性地拮抗angⅱ与at1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用，临床上主要用于高血压的治疗，同时厄贝沙坦在欧盟获准用于一个新的适应证，即治疗有高血压的2型糖尿病患者的肾脏病，是欧盟批准用于预防糖尿病早期及晚期肾脏疾病的第一个抗高血压药。 针对高血压患者血压有明显的昼夜节律改变，本课题组采用双层凝胶骨架片技术制备得到厄贝沙坦缓释片，该缓释片能有效控制厄贝沙坦在体内的释放过程，可以使药物在体内缓慢发挥持续、稳定的降压作用，并能减少由血药浓度突然增高而引起的不良反应的发生，实现夜间平稳降压。根据《药品注册管理办法》及《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》要求，必须对厄贝沙坦缓释片进行药代动力学研究，而“药物与血浆蛋白的结合”是主要研究内容之一。国内外未见厄贝沙坦的血浆蛋白结合率的相关研究报道，而药物的临床疗效和毒性反应与药物的蛋白结合力和结合率密切相关。因此，笔者对厄贝沙坦的血浆蛋白结合率进行研究[1-5]，为申报厄贝沙坦缓释片新药提供依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器 sartorius ba110s电子天平（德国sartorius公司）；dionex ultimate 3000高效液相色谱仪（dionex公司）；thz-82型恒温水浴振荡器（江苏金坛市宏华仪器厂）；xh-c旋涡混合器（江苏省金坛市医疗仪器厂）；sb 4200dts型双频超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份超声仪器有限公司）；透析卡（0.5~3.0 ml，美国pierce biotechnology公司）。 1.2 材料 厄贝沙坦（深圳迈瑞尔化学技术有限公司，批号：m-1007l08）；厄贝沙坦对照品（深圳迈瑞尔化学技术有限公司，含量99.75％）；氯雷他定（深圳迈瑞尔化学技术有限公司，含量99.83％）。乙腈（色谱纯，依能色谱有限公司）；其他试剂均为分析纯，购自广州化学试剂厂。健康人空白血浆由广州市番禺区中心医院提供。 2 方法与结果 2.1 分析方法建立 2.1.1 色谱条件 色谱柱为diamonsil c18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.02 mol/l磷酸二氢钾水溶液（磷酸调ph至2.6）（45∶55）；流速为1 ml/min；检测波长为245 nm；柱温为35℃；进样量为20 μl。在上述色谱条件下，理论板数按厄贝沙坦峰计不低于3 000。 2.1.2 溶液配制 2.1.2.1 空白透析液 精密称取磷酸氢二钾14.110 g，磷酸二氢钾2.592 g，氯化钠1.991 g，置于1 000 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成ph=7.4的缓冲液，即得。 2.1.2.2 厄贝沙坦储备液 称取105℃干燥至恒重的厄贝沙坦适量，精密称定，加空白透析液制成每1 ml含厄贝沙坦100 μg/ml的储备液，置4℃冰箱中冷藏备用。 2.1.2.3 供标准曲线用厄贝沙坦标准溶液 精密称取105℃干燥至恒重的厄贝沙坦对照品3.12 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为31.20 μg/ml的对照品储备溶液。精密吸取上述对照品储备溶液0.5、1.0、2.0、4.0、10.0、20.0 ml分别置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。制得浓度为0.31、0.62、1.25、2.50、6.24、12.48、31.20 μg/ml的对照品溶液。 2.1.2.4 供透析用厄贝沙坦溶液 吸取上述厄贝沙坦储备液适量，加空白透析液制成浓度分别为0.2、2.0、20.0 μg/ml的厄贝沙坦溶液，置4℃冰箱中冷藏备用。 2.1.2.5 内标溶液 称取氯雷他定适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含氯雷他定10 μg/ml的对照品溶液，置4℃冰箱中冷藏备用。 2.1.3 透析液样品处理 精密吸取透析内液或透析外液100 μl，加内标溶液10 μl，涡旋混合2 min，加入乙腈100 μl，涡旋混合2 min，离心（16 000 r/min）10 min，取上清液，置50℃水浴，氮气吹干，残渣加流动相100 μl，涡旋混合6 min，离心（16 000 r/min）10 mi