色谱-质谱联用技术剖析.ppt

对照仪器讲 * * 同分异构体的问题 问答色谱质谱联用中离子源的作用？ * 拿出实物给大家展示 软电离模式， 观察动画 * * 总结离子阱的功能 Orbitrap Orbitrap内部结构和尺寸 Orbitrap原理 应用领域 实验设计 1.实验目的明确 2. 资料搜寻与学习 3. 对照设计与细节考虑 4. 问题分析 5. 数据挖掘 LC-MS条件优化 尽可能多的样品信息 样品预处理 LC流速选择 液相柱（标准装柱填料直径5.0μm） 使用窄内径柱子提高分离效果 LC/MS流动相 LC添加剂 LC-MS缓冲盐使用注意事项 不可使用如下非挥发性盐 碱金属磷酸盐 硼酸盐 柠檬酸盐 LC-MS流动相添加剂和缓冲液总结 改变流动相比例提高分离度 等度洗脱VS梯度洗脱 二者比较 正负离子扫描选择 碎片谱优化 CID能量 离子累积时间 动态排除 HCD打碎 内标选择 作用： 校正样品前处理，进样及仪器响应误差 要求： 不能是待测样品中的物质 与待校正的物质有接近的保留时间和质合比 还有什么检测器？ 检测限 离子源类型 电子轰击电离源 electron impact ionization source, EI 化学电离源 chemical ionization source, CI 快原子轰击电离源 fast atom bombardment source, FAB 电喷雾电离源 electrospray ionization source, ESI 大气压化学电离源 atmospheric pressure chemical ionization source, APCI 基质辅助激光解析电离源 Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI 电子轰击电离 EI EI源主要用于挥发性样品的电离（GC-MS）。 原理：由GC或直接进样杆进入的样品，以气体形式进入离子源，由灯丝发出的电子与样品分子发生碰撞使样品分子电离。 所有的标准质谱图都是在70 eV下做出的。有机物分子可能被打掉一个电子形成分子离子，也可能会发生化学键的断裂形成碎片离子。 由分子离子可以确定化合物分子量，由碎片离子可以得到化合物的结构信息。 EI源特点 1）结构简单，稳定，电离效率高，易于实现； 2）质谱图再现性好，便于计算机检索及比较； 3）离子碎片多，可提供较多的分子结构信息。 4）当样品分子稳定性不高时，分子离子峰的强度低，甚至不存在分子离子峰。 ESI电喷雾电离源 ESI喷嘴横截面 ESI ESI源结构 ESI源特点 离子在液相产生 软电离模式, 可给出分子离子峰 有益于热不稳定化合物的分析 有益于中等到高等极性化合物分析 有益于大分子（蛋白/多肽） 带多电荷 大气压化学电离源（APCI） APCI源结构 APCI APCI源特点 离子在气态产生 不利于热不稳定化合物的分析 有益于低极性到中等极性化合物的分析 适合小分子（steroids-类固醇, 甾体化合物） 比ESI更能容忍缓冲盐 软电离模式，仅产生单电荷离子 离子化技术应用覆盖 基质辅助激光解析电离源 MALDI MALDI适用于生物大分子，如肽类，核酸类化合物。可得到准分子离子峰，碎片离子和多电荷离子较少. MALDI可使热敏感或不挥发的化合物由固相直接得到离子。 待测物质的溶液与基质的溶液混合后蒸发，使分析物与基质成为晶体或半晶体，用一定波长的脉冲式激光进行照射时，基质分子能有效的吸收激光的能量，使基质分子和样品分子进入气相并得到电离。 质量分析器 质量分析器是质谱仪的核心, 质量分析器的作用是将离子源产生的离子按m/z顺序进行分离并排列。 目前常用的质量分析器有： 磁质量分析器（Magnetic Sector Analyzer） 四极杆质量分析器（quadrupole mass analyzer） 飞行时间质量分析器（time of flight, TOF ） 离子阱质量分析器（ion trap） 单聚焦磁场分析器 * 在一定的B、V下，不同m/z 的离子其R不同，由离子源产生的离子，经过分析器后可实现质量分离。 离子进入分析器后，由于磁场的作用，其运动轨道发生偏转改作圆周运动。其运动轨道半径R可由下式表示： 上式中， m -离子质量 Z -离子电荷量 V -离子加速电压 B -磁感应强度 四极杆质量分析器 传统的四极杆质量分析器是由四根笔直的棒状电极与轴线平行并等距离的置悬着构成，棒的理想表面为双曲面。在一定DC/VC作用下，只有m/