药物分析第十六章抗生素类药物的分析剖析.ppt

弱酸性（pH2-6） A环C-4异构化 差向四环素 酸性（pH 2） C环脱水 脱水四环素 碱性 C环开环，形成内酯 异四环素 5）不稳定性 A.差向异构化 蓝色荧光 淡黄→黑 * A A pH2.0~6.0 （氢键，土霉素、多西环素不易差向异构化） * B.酸性脱水降解 λmax = 445nm λmax = 435nm D D D C B B C B C * C.碱性脱水降解 OH- * 1、HPLC 2、TLC (正相分配薄层色谱) 薄层板中加入EDTA→克服痕量金属造成的拖尾现象 3、IR 4、UV：最大吸收波长和制定浓度下的吸光度； 5、显色法 浓硫酸 三氯化铁 * * 1.有关物质——HPLC 2.杂质吸光度——UV 淡黄色→黑色 脱水四环素 橙红色 差向脱水四环素 砖红色 * 高分子杂质：药物中分子量大于药物本身的杂质的总称，1000~5000Da。与过敏反应有关。 生产过程 贮存过程 使用不当 高分子杂质 内源性(药物自身聚合物 ) 外源性(蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物 ) 发酵过程 控制重点 来源 * 1.基本结构 青霉素族 多肽（青霉素噻唑多肽） 聚合物 母核参于反应 侧链参于反应 头孢菌素族 与母核有关的N型聚合反应 侧链参与反应的L型聚合反应 * 2.特点 （1）生产工艺中产生杂质 发酵中产生 （2）降解 （3）以异构体存在样品，同聚和异聚反应可同时发生。 （4）高分子杂质的种类、数量与生产工艺密切相关（溶媒结晶、喷雾干燥） * 3.杂质控制方法 反相高效液相、离子交换色谱和凝胶色谱。 葡聚糖凝胶SephadexC－10 自身对照外标法 * 本章小结 抗生素的定义、特点及分类 β-内酰胺类结构、性质、呈色反应 氨基糖苷类代表药、结构、性质、鉴别试验 四环素类结构、性质（不稳定性） 高分子杂质定义、来源、分类 * * 1.酸性（羧基） pKa 2.5-2.8，酸性较强。碱金属盐水溶性好，有机碱盐难溶于水。 2.手性C （旋光性） ﹡ ﹡ ﹡ ﹡ ﹡ * 3.UV 青霉素类：苯环取代基 头孢菌素类：母核有共轭结构 260nm * 4. β–内酰胺环(四元环张力+酰胺键 ) 干燥条件较稳定，溶液不稳定 某些氧化剂、金属离子、温度 * (一)色谱法 HPLC (tR) TLC (Rf) (二)光谱法 IR UV NMR * * (三)呈色反应 1）羟肟酸铁反应——β–内酰胺环 β–内酰胺类 NH2OH·HCl NaOH 羟肟酸 Fe3+ H+ 显色（红、棕、褐） 2）类似肽键（-CONH-） a.茚三酮反应——α-氨基 * b.双缩脲反应——β–内酰胺类 碱性酒石酸铜 紫色 * 3）其他呈色反应 （偶合） 青霉素钾和青霉素钠呈红棕色 (四)各种盐的反应 焰色反应——K+、Na+ * (聚合物、有关物质、异构体等) 1.聚合物 头孢他啶中聚合物测定—分子排阻色谱 凝胶色谱分子筛机制 主成分自身对照法 面积归一化法 限量法 自身对照外标法 萄聚糖凝胶 立体网状结构图 * 2.有关物质与异构体 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 取本品适量，精密称定，加流动相制成约含0.25mg/ml的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相制成2.5 ?g/ml的溶液，作为对照溶液。取对照溶液20?l注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高约为记录仪满量程的10%，再取供试品溶液和对照品溶液各20?l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3.5倍，供试品溶液如显杂质峰，量取各杂质峰面积的和，其中E异构体峰面积不得大于对照溶液主峰面积之和(1.0%)，△3-异构体峰面积不得大于1.5倍(1.5%)，其余单个杂质峰面积的和不得大于3倍(3.0%)。(供试品溶液中任何小于对照品溶液主峰面积之和0.05倍的峰可忽略不计) * 青霉素钠(钾)的吸光度检查： 本品加水制成每1mL含有1.80mg的溶液，照UV-Vis法，在280nm波长处测定吸光度，不得大于0.10；在264nm波长处有最大吸收，吸光度应为0.80-0.88. 该法264nm处吸收值用来控制青霉素钠(钾)的含量，280nm处吸收值用来控制杂质的含量。 3.UV * 4.有机溶剂：用GC法或者HPLC法 5.结晶性 第一法(偏光显微镜法) 第二法(X射线粉末衍射法) * 碘量法 汞量法 酸碱滴定法 羟肟酸比色法 HPLC法 * 阿莫西林克拉维酸钾片 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8g，加水900 ml溶解，用磷酸或10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4.4±0.1，加水