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《园艺植物病理学》实验指导书 园艺植物病理学实验是植物病理学课程的重要组成部分，目的是以植物病理学和其它相关学科知识为基础，追溯引起植物病害发生的原因及过程，认识不同病原所致病害的症状特点及病原形态特征。掌握植物病害实验及研究的基本技能及方法，注重学生观察、思考、分析、解决实际问题的能力培养，为将来的研究工作打下基础。本实验适用于专业课程的实验教学，共分为次实验，个学时，重点要求学生认识和掌握的症状和病原物的形态特点、学习显微绘图、制片技术要求学生在实验课前预习实验指导，明确实验的目的意义，复习实验相关理论知识，了解实验的方法、步骤及重难点；实验课上在教师指导下，按照要求的内容和方法，认真、独立地进行实验，分析实验数据和结果，认真完成实验报告，总结实验所得并找出实验中不足之处的原因，培养严谨的科学态度。 一、实验目的与要求 认识各种症状类型，分清症状与病征，为诊断植物病害打下初步基础。 二、实验用品与材料 各种植物病害标本，扩大镜，铅笔，作业本。 三、实验内容与方法 按照田间观察及展示出来的标本，参照教材识别各种作物病害，受害后表现的病状与正常特征有什么区别。 四、作业：将观察结果填入下表 序 号 寄 主 病 名 病 状 病 征 病 原 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 实验二 真菌一般形态观察 一、实验目的与要求 1、观察真菌的营养体现营养体的变态。 2、观察真菌的繁殖体的主要类型。? 二、实验用品与材料 显微镜、蒸镏水滴瓶、解剖器、纱布、载玻片、盖玻片等。 三、实验内容与方法 1、肉眼观察培养皿中之绵腐菌，用挑针或尖头镊子取少许菌丝放载玻片水滴中，然后加盖盖玻片。先用低倍镜观察菌丝的形态及有无隔膜。 2、菌核：肉眼观察油菜菌核的外形。并用徒手切片法制片置显微镜下观察疏丝组织和木　薄壁组织。 3、孢子囊及孢囊孢子：观察根霉菌玻片标本，用低倍镜注意观察孢子囊，孢囊孢子及　根等。 4、分生孢子：从培养皿内取节稻瘟的茎节一段，放载玻下直接用低倍镜观察稻瘟病菌的分生孢子梗及分生孢子生情况。再用挑针挑取少许灰色霉菌层，放载玻片水滴中观察稻瘟病病菌的分生孢子及分生孢子梗的形成。 5、卵孢子：用显微镜观察十字花科植物的锈病菌卵孢子的玻片标本。 6、子囊孢子：观察油菜菌核病菌子囊盘的纵切面玻片标本，子囊盘内有平行? 排列的子囊，每个子囊内有八个子囊孢子。 四、作业 1、画出根霉菌病原菌形态结构图。 2、画出十字花科植物的锈病菌卵孢子形态结构图。 实验三 植物病原菌的分离培养 一、实验目的与要求 学会病原真菌分离，培养的一般方法。 二、实验用品与材料 接种环，解剖器，酒精灯、70%的酒精，95%酒精、脱脂棉、特制腊笔，火柴、灭菌培养皿、灭菌水(三角瓶装)、PDA与肉汁培养基(试管装)，无菌室或分离箱，紫外灯，5%碳酸、小酒杯、试管架、废液缸。? 三、实验内容与方法 1、准备工作： （1）做好分离室的清洁，用5%碳酸或1：50福尔马林在分离室或分离箱中消毒，或紫外线灭菌10-20分钟。 （2）准备好用具与材料：酒精灯、火柴、70%酒精、特种腊笔，灭菌培养皿，灭菌水，灭菌培养基，0.1%升汞25%小酒杯，接种针，纱布、黄瓜霜霉病叶。 （3）融化培养基。 （4）穿上工作服，用肥皂洗手。 2、分离工作： （1）点燃酒精灯。 （2）用少量脱脂棉蘸70%酒精擦手消毒。 （3）取灭菌培养皿二套，在培养皿上注明分离材料和日期及分离者的姓名。 （4）右手拿已溶化之培养基一管，左手将棉球除去，管口在火焰上灭菌（为无菌操作），然后左手轻轻将皿盖揭开一小总部分，皿盖以培养基能倾入为度，不能全部打开，从侧面倾入培养基，再轻轻盖上。 （5）轻轻摇动培养皿，使培养基成平面。第二皿同上。 （6）取黄瓜霜霉病叶，选择典型单独病斑，用剪刀在病健交界处剪取大小约4mm2组织10块。 （7）将剪好之病组织放小酒杯中，先用70%酒精浸几秒钟，后将此酒精倾入废酒精缸中，即可倾入0.1%升汞浸泡1-2分钟，将此升汞倒回原升汞瓶中，然后用灭菌水换洗三次，第一次约洗5分钟，第二、三次洗2-3分钟（用火焰灭菌镊子操作）。 （8）将洗过之病组织用灭菌镊子移入培养皿的培养基平面上，每皿放4-5块，将培养皿翻转，放入26-28℃的恒温箱内培养。 （9）数日后在病组织周围，长出菌丝体而形成菌落，经鉴定无误（可用无菌操作，排少许菌丝镜检），留作纯菌种。 （10）用火焰灭菌接种针在菌落连缘取一小块带有病菌的培养基。移入试管培养基斜面上，放在26-28℃的恒温箱内培养后即得纯菌种。? 四、作业 1、每人交纯菌种3支（种）。