(分离分析.docVIP

色层分析法的简介及应用摘要：本文简要介绍了色层分析法的定义、原理、分类及其在生物和医学制药方面的应用；并简要介绍了色层分析法的发展前景。 关键词：色层分析法；生物；医学制药；发展前景 1. 色层分析法的定义 色谱法（chromatography）又称“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。 2.色层分析法的机理 色谱过程的本质是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在固定相上相互分离。 3.色层分析法的分类 3.1按两相状态　 气相色谱法可分为气固色谱法和气液色谱法，液相色谱法可分为液固色谱法和液液色谱法 3.2按固定相的装填方式不同分类 利用滤纸作为固定相的层析分离可分为薄层层析和柱层析。薄层层析是固定相在玻璃板、铝膜等支持物上铺成薄层的分离分析；柱层析是固定相装填在管中成柱形，在柱中形成进行的层析分离。 3.3按分离的原理不同分类 根据物质的分离机制，又可以分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。 4.吸附色谱 吸附层析是用吸附剂作固定相，利用被分析组分对吸附剂表面吸附能力的不同和在流动相中溶解度的差异来进行分离分析的方法。 常见的吸附剂有活性炭，氧化铝，硅胶、氧化镁、磷酸钙、石膏、纤维素、淀粉和糖等。 吸附剂要有高选择性以实现很好的分离，高容量以减少吸附剂的使用量，对于快速吸附具有很好的传递性，具有化学和热稳定性，在流动相中不溶解以保持吸附的特性，具有一定的机械强度和惰性，以防止破坏和腐蚀；易于充填或铺层、抗污染性强，价格便宜。 吸附剂在使用前要先过筛，除去大颗粒；或使用悬浮法，除去细小颗粒，要用酸、碱浸泡，再用沸水煮，清水洗，最后用有机溶剂如甲醇处理，得到几无杂质，颗粒又均匀的吸附剂！ 吸附剂的用量是根据其自身的操作容量和分离物中各成分的性质决定的。当操作容量高时，吸附剂用量少，一般吸附剂的用量为分离样品的30—50倍。若样品中各成分的性质相似难以分开始，则吸附剂用量应增大，有时大于样品的100倍。 5.亲和层析 5.1亲和层析的基本原理 首先待分离物质S借助静电引力、范德华力及结构互补效应等作用吸附于固相载体L上，与其他物质分离： M—L—S 然后通过改变起始缓冲液的pH值，或增加离子强度，或加竞争性抑制剂等方法使待分离物从固相载体上脱离下来。 5.2亲和层析的分类及特点 特异性配体亲和层析：配体一般为复杂的生命大分子物质（如抗体、受体、酶的类似物等），其特点是吸附特异性强结合力大。 通用性配体亲和层析：配体一般为简单的小分子物质（如金属、燃料，氨基酸等），其成本低，具有较高的吸附容量，但分辨率不及前者。 亲和层析的优点是上样量大，分辨率高，操作步骤少，被分离物质的活性不宜丧失；缺点是每分离一种物质都必须找到合适的配体，并将其制备成固相载体。 6.凝胶层析 凝胶层析是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离，也被称为体积排阻层析、分子筛层析，凝胶渗透层析。 6.1凝胶层析的基本原理 当样品溶液通过凝胶柱时，相对分子质量较大的物质沿着凝胶颗粒间的空隙，随着溶剂流动，首先流出层析柱；相对分子质量较小的的物质可自由地进出凝胶颗粒的网孔，使流量增长，移动速度慢而最后流出层析柱；中等大小的分子在大分子的物质与小分子物质之间被洗脱；按物质分子大小不同而被分离。 6.2凝胶层析法的应用 凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类物质；对于分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开；利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐，去热源和脱色。 7.色层分析的应用 7.1 色层分析法测定蔬菜、水果中农药残留量的研究 农药在防治农作物病虫害，控制人蓄传染病提高，农蓄产品量和质量，以及确保人体健康等方面。但是，大量广泛使用农药也会造成对食物的污染，农药对食物的污染途径主要有：农田施用农药时直接污染农作物，用水质的污染进入水产品；土壤中沉积的农药通过农作物的根系吸收到作物组织内部而造成污染；大气中漂浮的农药随风向、雨水对地面作物、水生生物产生影响；饲料中残留的农药移入擒蓄体内，造成此类加工食品的污染。 食品中普遍存在农药残留，残留量随食品种类及农药种类不同而有很大的差异。由于农药的毒性都很大，有的还可以在人体内蓄积，对人体造成危害。为提高食品的卫生质量，保证食品的安全性，保障消费者身体健康，许多国