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第三章 固定化酶反应动力学 酶的固定化 外扩散对固定化酶反应动力学的影响 内扩散对固定化酶反应动力学的影响 扩散影响下的动力学假象 3.1 酶的固定化 背景 酶的固定化方法 影响固定化酶活力的因素 固定化对酶动力学特征的影响 3.1.1 背景 游离酶参与反应的缺点：1）稳定性差、液相中含量少，2）反应结束后不易回收、3）酶、底物和产物处于同一相，对产物分离不利 固定化酶：即水不溶性酶，是通过物理的或化学的方法，将溶液酶转变为在一定的空间内其运动受到完全约束，或受到局部约束的一种不溶于水但仍具有催化活性的酶，它能以固相状态作用于底物进行催化反应 其优点：可以长期保留在反应器内反复使用，易实现连续化生产；反应结束后易与产物分离，简化了产物分离工艺，其大多数固定化酶稳定性也比游离酶好 缺点：活力会下降，反应易受传质速率的控制，对大分子底物、产物不适用 研究历史：1916年，Nelson和Griffin发现酵母蔗糖酶能被吸 附到骨碳粉末上，并在吸附状态下具有催化活性；以后以色列科学家对酶的固定化方法、固定化的理化性质等进行了开创性的研究，1969年日本的千叶一郎将固定化氨基酸酰化酶应用于DL－氨基酸的拆分上，1971年国际酶工程会议给出了固定化酶的定义。 3.1.2 酶的固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 影响固定化酶催化活力的因素 构象效应：由于载体与酶之产的共价键作用，引起酶的活性部位发生扭曲变形，改变了酶活性部位的三维空间结构，减弱了酶与底物的结合力，导致酶的活性下降。 位阻效应：由于载体选择不当或载体空隙太小，致使酶的活性部位不易与底物结合，对酶的活性部位造成了空间障碍。 分配效应：由于固定化酶载体的亲水性、疏水性及静电作用等，使得底物和产物及其效应物在微环境和宏观环境中浓度不同的现象。 扩散效应：底物、产物和效应物的迁移和运转速率受到限制的一种效应。 酶的固定化对其动力学特征的影响 原因：由于酶的活性中心的氨基酸残基的空间结构和电荷状态发生了变化，或者固定化酶的周围形成了能对底物传递产生影响的扩散层或静电的相互作用等。 对底物专一性的改变 稳定性的改变 最适pH值和温度的改变 米氏常数的改变 3.2 外扩散的限制作用 特点 液固相间的传质速率 外扩散的限制作用 外扩散有效因子 3.2.1 外扩散的特点 酶促反应过程与传质过程是各自独立的 底物先从液相主体扩散到固定化酶的外表面 发生反应 产物从固定化酶的外表面扩散进入液相主体 3.2.2 液固相间的传质速率 由于搅拌，反应体系中的液相主体的底物浓度处处相同，假定为S0，底物在颗粒表面因反应而消耗，同时由于液体的粘性，在固液表面附近产生一个滞流层，而固体表面液体流速率为0，因而在滞流层产生浓度梯度，进而导致物质的传递，且传质阻力全部集中在滞流层。 根据Fick第一定律，得液固相间的传质速率为 其中Ds为底物在液相中的分子扩散系数，m2/s a为固定化酶的比表面积，m-1 3.2.3 外扩散的限制作用 固定化酶外表面的反应速率可表示为 当化学反应速率和传质速率相差不大时，体系在稳态条件下，有下式成立，传质速率＝化学反应速率，即： 求解此方程，得出 无因次化处理，令 3.2.4 外扩散有效因子 ， 根据此定义式知： 因此可以根据 判断外扩散的影响。 因此在利用固定化酶进行反应时，总是希望 尽可能接近1，此时应控制反应条件，使Da准数尽可能地小，由 知，可以通过降低固定化酶颗粒的粒径，提高液体的流速及适当增加液相主体的底物浓度来使Da减小。 的关系 由图中可以看出： 当底物浓度增加而Da不变时，随着底物浓度的增加， 增加，即增加底物浓度，可以克服外扩散的影响，当底物浓度不变时，Da增加， 减少，且当Da0.1时， 接近1。 可观测丹克莱尔准数（ ） 令 ，当传质速率和反应速率相差不大时，在稳定状态下有下式成立， ，因此得到 ，从此式中可以看出： 当 时，