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BSA毛细管电色谱柱的制备及手性分离应用 02化工专业： 伍品端 指导老师 ： 马志玲 副教授 目录 Ⅰ.研究意义和研究现状 Ⅱ.实验部分 Ⅲ.结果与讨论 Ⅳ.实验创新点 Ⅰ.研究意义和研究现状 手性分离的重要性 生物大分子几乎都具有“手性”特征。手性药物各对映体的药效学等可能存在很大的差异 。 因而评价手性药物各对映体的生物学活性,建立快速、准确、灵敏的对映体拆分方法具有十分重要的意义。 Ⅰ.研究意义和研究现状 ? Ⅰ.研究意义和研究现状 CEC的优点： Ⅰ.研究意义和研究现状 Ⅱ.实验部分 二、在毛细管内合成整体柱 三、键合BSA蛋白 四、使用选择性键合蛋白质对手性物质进行分离。 Ⅲ.实验结果与讨论 一、整体柱基质聚合条件的优化 二、整体柱分离D,L-组氨酸对映体 孔结构——SEM CEC分离组氨酸对映体结果 表5 缓冲液的pH值对分离效果的影响 Ⅳ实验创新点 通过条件实验，用IR、测定背压、SEM和氮吸附法等方法，确定出最佳聚合条件，成功制备出毛细管电色谱柱。 前景展望 目前，CEC在药物分析方面已有广泛的研究，集中在与药物相关的杂质分离和手性药物的分离等。 随着毛细管电色谱技术的不断完善和提高，将在生物技术、环境保护、农业化学、精细化工产品、食品工业等多个领域的分析中得到应用。 在可预计的将来，CEC作为一种发展中的快速分离技术，将有更广泛的应用前景。 * * 拆分对映体的色谱技术： 高效液相色谱 高效毛细管电泳 超临界流体色谱 …… 毛细管区带电泳 胶束电动色谱 毛细管电色谱（CEC）(以电渗流为驱动力的微柱液相色谱技术) …… 对映体分离机理： 手性选择剂与对映体主要为疏水和静电作用 ，只有具备特定空间构形和化学官能团的分子才能与这一区域结合 。 CE LC CEC 高效性 高选择性多功能性 高效性、高选择性、多功能性 常用CEC手性选择剂 人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、抗生素蛋白、卵类粘蛋白、α-酸性糖蛋白 等。 手性引入方法 柱前手性衍生化法 手性流动相添加剂法 手性固定相法 √ 总之，CEC以样品与固定相之间的相互作用为分离机理，以电渗流为流动相驱动力。不仅具有CE水平的高柱效，而且具有HPLC水平的高选择性。 而且，CEC整体柱在手性分离中也显示出一定优势。 Ⅰ.研究意义和研究现状 毛细管处理 在毛细管内聚合整体柱基质 用动态法在聚合整体柱基质上键合BSA蛋白 使用选择性键合蛋白质对手性物质进行分离 1.仪器和试剂（略） 2.实验方法 单体 交联剂 Epoxy method 分离对象：D,L－组氨酸 分离条件： 运行缓冲溶液：2mM磷酸盐缓冲液 分离电压：＋6kV 检测方法： 电导检测 活性基团——IR 渗透性——背压 孔结构——SEM、氮吸附法 整体柱基质聚合条件的优化 表1 整体柱各性能的影响因素 最佳聚合条件 活性基团 √ 渗透性 √ √ 孔结构 √ 单体含量 交联剂含量 致孔剂含量 环氧活性基团——IR 环氧基和酯基分别在约910cm-1和1730cm-1处有吸收。 图1 整体柱基质的红外光谱图 单体含量对整体柱活性基团含量的影响 固定致孔剂和溶剂的含量，改变单体（ ）和交联剂（ ）相对含量，用红外光谱法比较环氧基吸收峰（约910cm-1）和酯基吸收峰（约1729cm-1）峰面积。 样品号 单体/交联剂 环氧基峰面积 酯基峰面积 环氧基与酯基峰面积之比 1＃ 3：2 33.4055 59.3904 0.5625 2＃ 1：1 26.8072 49.1596 0.5453 3＃ 2：3 26.3245 53.5184 0.4919 表2 环氧基与酯基峰面积比较 1.交联剂含量对整体柱背压的影响 原因：随着交联剂用量的减少，相分离提前，使孔径 增大。 C3# 3:2 0.005 3.4 C6#