过氧化实验操作步骤解析.doc

材料准备：幼苗培养时选取饱满的种子,经过10%次氯酸钠消毒后,于30℃恒温催芽3天,之后选取长势一致的种子播于96孔PVP板中,并置于盆中(长24cmX宽24cmX高10cm)。在RXZ-500C人工气候箱中进行幼苗培养。培养前1周放入水中培养,于第3周时置于木村B半营养中,于第4周时放入木村B全营养液中,将生长4周的幼苗置于20%PEG-6000中模拟干旱胁迫,分别处理5 h、24 h、72 h,以不进行干旱胁迫营养液培养的幼苗为对照(CK)。为防止根系缺氧,用加氧设备定期加氧。人工气候箱白天温度设定为29°C,夜间设定为27°C,14 h光照/12 h黑暗,光强为220001x。胁迫结束后马上取样,取幼苗所有叶片和根,用银箔纸包好,放入液氮中迅速冷冻,然后保存于-80°C超低温冰箱中储存,用子生理指标的测定。试验设置3次重复,取样时每个品种取一盘,每20株为一次重复。 酶类物质和非酶类物质 1、抗氧化酶活性测定 酶液提取:取样品0.25 g于冰研钵中,加入5 ml预冷的0.05mol/L 磷酸缓冲液(pH7.8)(内含5mmol/LEDTA,2 mmol/L抗坏血酸,2%聚乙烯吡咯烷酮),冰浴研磨成浆,在4°C 10000 g下离心30分钟,上清液用于超SOD、POD、CAT和APX活性测定。 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定:釆用氮蓝四唑法(Dhindsa等,1981)。在微