[高效液相色谱仪.docVIP

? 高效液相色谱仪 操作过程：??? 1、 开机操作：??? （1）、打开电源 .?? （2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时，打开工作站，先打开在线工作站；打开离线状态的工作站可以离线处理图谱与出报告?? （3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；提到异丙醇溶液，我还学到一点就是，在用完反相后要换成正相时，我们需要用异丙醇过度30分钟左右，然后在换上正相柱??? （4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；?? （5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。?? 2、 先以所用流动相冲洗系统一定时间，如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相，正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；???? 3、 建立色谱操作方法，注意保存为自己清楚的方法名，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；??? 4、 使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；???? 5、 溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；????? 6、 实验结束后，如果有盐一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。如果是一般的溶剂系统就直接用甲醇冲洗，冲洗过程中关闭D灯、W灯；以延长灯的寿命??? 7、 关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；??? 8、 使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。未经操作培训，不得擅自使用仪器。????? 流动相：????? 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；??? 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；?? 3、 使用双泵时，最好不要有机相与水相直接调用，这样可能造成管路气泡，最好我们根据自己的需要配制一定浓度的有机相与水相的混合溶液，再与水相混合调用??? 4、换流动相后，要purge??? 样品：??? 1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；??? 2、 用流动相或比流动相弱的溶剂制备样品溶液，若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小，尽量用流动相制备样品液； 手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；???? 色谱柱：??? 1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；?? 2、 使用符合要求的流动相；????? 3、 使用保护柱；???? 4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。??? 5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇或乙氰冲洗，取下后紧密封闭两端保存；??? 6、 不要高压冲洗柱子；???? 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱，使用硅胶柱时还要特别小心流动相的PH范围在2~8之间；使用过程中注意轻拿轻放。??? 8、上柱时我们要注意柱子的方向，千万不要装反了。 如何正确配制和准备流动相？ 点击次数：405 发布时间：2012-11-24 1、溶剂的纯化 ?? 在高效液相色谱仪分析中，正相色谱以已烷作为流动相的主体，二氯甲烷、氯仿、乙醚作为改性剂;反相色谱以水作为主体，以甲醇、乙睛、四氢吠喃作为改性剂。HPLC分析均应使用HPLC级纯度的溶剂，AR级的溶剂可能会由于杂质的存在而出现鬼峰。正相色谱分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中经常含有微量的水分，这会改变液固色谱柱的分离性能，使用前应用球形分子筛柱脱去水分。反相色谱分析中使用的甲醇、乙睛、四氢吠喃，不必脱除微量水，但甲醇、乙睛等使用前最好经硅胶柱净化，去除具有紫外吸收的杂质。要保证配制流动相用水的纯度足够高。由于去离子水通常含有一些有机物，所以不适合用于HPLc分析用，最好使用超纯水（电阻率18Mfl.cm）。如果条件有限，可将去离子水再次蒸馏，现用现蒸，保持新鲜，还能脱去CO2，使用效果也不错。 2、缓冲溶液 ?? 有些分析需要用到缓冲盐的流动相，配制时盐试剂要用AR级以上、没有污染、过期;现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生