过氧化物酶同工酶含量测定[精选].pptVIP

过氧化物酶同工酶含量测定 实验原理 实验材料与器材 实验试剂 实验步骤 实验原理 考马斯亮蓝G-250（coomassie brilliant blueG-250）测定蛋白质酶含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区域结合后变为青色，前者最大吸收值在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（1～1000μg），蛋白质与色素结合后在595nm吸光值的大小与蛋白质的浓度呈正比，故可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝G-250（coomassie brilliant blue G-250）与蛋白质的结合十分迅速，2min左右即可达到平衡，其结合物在室温下1小时内保持稳定。此法灵敏度高，易于操作，干扰物较少，是一种比较好的定量方法。其缺点是在蛋白质浓度太高时线形偏低，且不同来源蛋白质与色素的结合状况有一定差别。 实验材料与器材 （一）材料 菠菜叶片（或苜蓿种子） （二）仪器设备 722分光光度计 烧杯 量筒 移液管 具塞刻度试管 实验试剂 1．标准蛋白溶液：100μg/ ml牛血清白蛋白：称取牛血清白 蛋白25 mg，定容到100ml，取40ml该溶