常见疫病实验室检测方法..docVIP

常见疫病实验室检测方法 目录 常见疫病实验室检测方法 1 目录 1 常见ELISA操作方法 2 亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断 ELISA 检测试剂盒 2 猪瘟抗原检测试剂盒 5 口蹄疫结构蛋白检测方法（ 3ABC-I-ELISA） 11 犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 13 犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 15 常见PCR操作方法 17 猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 17 猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 20 常见RT-PCR操作方法 23 口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 23 H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(20次) 25 新城疫病毒RT-PCR 检测试剂盒 27 猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒 30 凝集、血凝实验操作方法 33 弓形虫间接血凝试验(lHA)试剂使用说明书 33 伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 34 猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT〉诊断试剂盒使用说明书 35 猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 36 猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 37 高致病性禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验程序 40 琼脂扩散试验 42 鸡马立克氏病 42 禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 44 荧光抗体检测 46 猪瘟荧光抗体试验操作程序 46 对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA)检测 47 血清学诊断检测常用试剂配方 49 禽流感HA和HI试验用溶液的配制 49 补充实验 52 猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 52 猪流感病毒RT-PCR检测 55 猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp2 1594~1680变异株）RT-PCR检测实验 57 布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 60 常见ELISA操作方法 亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断 ELISA 检测试剂盒 一 试剂盒内含物 .说明书 亚洲 1 型口蹄疫阳性对照血清( 己稀释浓度为 1:8) .96 孔 ELISA 板 亚洲 1 型口蹄疫阴性对照血清 .液体稀释槽 3% 双氧水 .U 型96孔抗原抗体反应板 25×PBST洗涤液(稀释时准确量取) .封板膜 豚鼠抗血清稀释液 .灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原 (用冰决包裹 ) 终止液 .亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清 包被缓冲液(碳酸盐)胶囊 .亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清 底物 (柠檬酸 -磷酸盐)缓冲液片剂 .兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物 OPD 片剂 二 器材准备 ( 需用户自备 ) 1.移液器:5-50μl移液器、0.2—10μl移液器、50—200μl移液器、50—300μl 12道移液器各一把。 2.移液枪尖 (若干)。 3.抗原抗体反应板:微量血凝板(U型、V型均可)5块,本试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释和抗原抗体反应。注:抗原抗体反应板可重复使用,实验后,用水冲洗干净,然后用无离子水沸水浴30秒,晾干,待用。 4.超纯水 , 无离子水或蒸馏水。 三、试剂准备(需用户完成) 1.包被缓冲液(PH9.6) 将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中溶解即可。4℃存放,1月内有效。 2. 洗涤液(PBST) 将本试剂盒配备的 25 倍浓缩 PBST 液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4) 3.底物溶液 取1片柠檬酸—磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100mL无离子水中,溶化后,取50mL溶液, 再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装（5mL/ 瓶或 10Ml∕瓶 ), 避光之-2O℃保存。 用前避光溶化 ,临时每1mL上述溶液加 10μL 本试剂盒配备的 3% 的双氧水(H202) 。务必加双氧水! 四、操作步骤 1.用包被缓冲液稀释亚洲 1 型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000), 在 ELISA 板上每孔加 50μl, 振荡 , 封板或置湿盒内，室温过夜。 2. 抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应 根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。 图 1 96 孔酶标板检测 10 份样品布局图 S1 1:8 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 +1:32 -1:4 1:16 1：64 1:8 1:32 1：128 1:64 1：256 1:128