巴斯德毕赤工酵母表达系统研究进展.pptVIP

毕赤酵母中外源糖蛋白的糖基化： 酵母菌中的蛋白糖基化修饰有两个主要步骤，即在内质网膜内腔中的寡聚多糖核装配以及在高尔基体中的糖外链延伸。 糖基分为两种类型：O-糖基和N-糖基。O-寡聚多糖只有甘露糖，但许多高等真核生物的蛋白在相同的糖基化位点上都含有唾液酸基团，而且糖基化位点也存在差异。N-寡聚多糖核与高等真核生物完全相同，但外侧链却有明显差异。而这种差异往往会导致蛋白生物活性下降、免疫原性增加等不良影响。 线性化重组载体 感受态菌株 平板筛选 PCR鉴定与筛选 MD和MM平板筛选 筛选多拷贝外源基因转化子 G418 表达鉴定与筛选 mRNA水平 蛋白表达水平 高效表达种子工程菌 发酵罐工艺建立 Muts和Mut+ 技术路线： 根据启动子的特性选择 甲醇诱导型启动子如PAOX1 ，但甲醇易燃，也不适用于食品生产，这时可选择PGAP,但不宜用于表达对宿主有毒的蛋白。 强启动子可能产生无功能的蛋白 由于超过宿主自身翻译后修饰加工的能力，引起蛋白的错折叠、不加工或错定位。这是可选用较温和的启动子如PPEX8(一种过氧化物酶体基质蛋白启动子)。 启动子的选择 目的基因的碱基组成 基因富含A+T，会导致转录提前终止 种属特异性影响 稀有密码子制约翻译速率 此时需要进行全基因的合成，使