穿心莲内酯的不同提取工艺及其对的抗炎作用的研究..docVIP

机能学科实验中心学生设计性实验 一、基本情况 项目名称 穿心莲内酯的不同提取工艺及其对的抗炎作用的研究 课　题　组　成　员 姓　名 学 号 班　别 联系电话 指导老师 二、实验的目的 穿心莲（Andrographis paniculata ness）为爵床科穿心莲属植物，是我国常见中药，是抗病毒的首选药物之一。穿心莲内酯和黄酮为穿心莲主要活性成分[3]，有清热解毒、凉血、消肿之功效，用于细菌性痢疾、慢性迁延性肝炎、尿道感染、急性扁桃体炎、咽喉炎、气管炎、结肠炎等疾病，被《中国药典》收载。 提取穿心莲内酯的方法很多。工业生产常用的方法有水提法、醇提法，但是存在提取率低，成本高的缺点。赵玉红和李勇等人[2]和郭彬和娄勇[4]研究发现，，水提取一般可将多糖等多种水溶性杂质提取出来，水提取出膏率较高，但穿心莲内酯水溶性较低，有效物质提取量低，不适合穿心莲的提取。醇提取穿心莲内酯含量高，但出膏率较低，成本高，污染严重，所以总体效率不高。他们用碱提取方法，穿心莲内酯含量及出膏率均较高，且提取成本较低，避免了醇提取叶绿素等脂溶性杂质的引入，是较为理想的提取溶剂。现阶段，用碱水提取穿心莲内酯成为研究的热点。但是，用碱水提取穿心莲内酯，是否会对穿心莲的抗炎药效产生副作用？关于这方面的研究很少。所以，我们小组打算通过用两种不同的穿心莲内酯提取法（碱水提取和醇提取），把提取后的穿心莲内酯作用于致炎的大鼠，比较两者药效的强弱。 主题词：穿心莲内酯，提取工艺，大鼠抗炎作用 三、实验仪器、材料、试剂 实验仪器： 100ml烧杯3个、100ml圆底烧瓶2个、100m;锥形瓶2个、100ml蒸馏瓶2个、100ml容量瓶2个、25ml容量瓶2个、1ml注射器2只，5ml注射器2只、10ml量筒2个、过滤器 、酒精灯、冷凝管、胶头滴管、灌胃器、干燥器、铁架台、水槽、真空泵、冷凝旋套管、烘箱、 材料： 穿心莲全叶200g、SD大鼠10只、 试剂： 乙醇（分析纯）500ml、甲醛（分析纯）100ml、0.01%的碳酸钠碱水500ml、HCL10ml、苦味酸一瓶、1%角叉菜胶悬液1ml、生理盐水10ml、 四、实验内容、方法 实验前准备： （一）用不同方法提取穿心莲内酯 1、乙醇提取穿心莲内酯： 1）回流提取：称取100g穿心莲全叶药材，先用3倍量的乙醇温浸2h，按回流提取的方法（附表一），回流提取3次，第一次用10倍量提取1.5h，第二次用7倍量提取1h，第三次用7倍量提取1h。 2）减压浓缩：过滤，量取50ml提取液，用减压浓缩法（附表二）浓缩至约25ml。 3）出膏：把浓缩后的提取液放在105℃烘箱干燥3h，取出至干燥器冷却30min。 4）配置溶液：精密称取浸膏75.00g于25ml容量瓶中，加入甲醛稀释至刻度，配置成浓度3g/ml ，摇匀静置，储存备用。 用碱水提取法提取穿心莲内酯 1）回流提取： 称取100g穿心莲全叶药材，用0.01%的碳酸钠碱水按照回流提取法（附表一），回流提取三次。第一次10倍量2h，第二次6倍量2h，第三次4倍量1.5h。 2）中和提取液：过滤，用pH试纸测量溶液的pH值，通过滴加HCl调节容易至中性。 3）减压浓缩：量取50ml提取液，用减压浓缩法（附表二）浓缩至25ml。 4）出膏：把浓缩后的提取液放在105℃烘箱干燥3h，取出至干燥器冷 却30min。 5）样品溶液配制：精密称取浸膏75.00g于25ml容量瓶中，加入甲醛 稀释至刻度，摇匀静置，配置成浓度3g/ml ，储存备用。 实验过程： （一）大鼠炎症模型的建立： 1、用排水法分别测定每只大鼠左、右后肢正常足跖的容积并且记录。 2、在每只大鼠的左、右后肢足跖注射1%角叉菜胶悬液（0.1ml/只）致炎。 （二）给药并测定左右足跖： 分组：把注射了1%角叉菜胶悬液的大鼠随机分成三组。一组为醇提取穿心莲内酯（A1组）4只，一组为碱水提取穿心莲内酯（A2组）4只，一组为对照组（A3组）2只。 标记：A1组在头部用苦味酸做标记；A2组在双侧脸颊用苦味酸做标记， A3组不做标记。并在大鼠颈背部（尽量靠近颈部）表上号码1~4。 给药：给A1组大鼠每只用醇提取穿心莲内酯溶液灌胃，用量1ml/kg。 给A2组大鼠每只用碱水提取穿心莲内酯溶液灌胃，用量1ml/kg。 给A3组大鼠每只用生理盐水灌胃0.2ml 测量：给药后每隔0.5h用排水法测量大鼠的足跖容积，并且计算抗炎抑制率。在 给药4.5h后停止