DNA重组技术的基本工具1cx要点.ppt

选修3 生态工程 生物技术的安全性 和伦理问题 胚胎工程 细胞工程 基因工程 现代生物科技 专题 专题1 基因工程 别名： 操作环境： 原理(本质)： 操作水平： 结果(优点)： DNA重组技术 生物体外 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 基因工程的产物 普通棉花　　 抗虫棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 转基因棉花植株 培育抗虫棉的 关键工具是？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 运载体 DNA重组技术的基本工具 一、限制性核酸内切酶----分子手术刀 主要来自原核生物（约4000种） （1）识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 （2）使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 形成两种末端： 黏性末端或平末端 1.来源 2.功能 3.特性 4.产物 专一性 识别特定核苷酸序列 切割特定切点 * 5.仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何特点？ 限制酶的识别序列 反向中轴对称排列 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 1．下列关于基因工程的说法中，正确的是(　　) A．基因工程的设计和施工都是在细胞水平上进行的 B．目前基因工程所有的目的基因都是从供体细胞中直接分离得到的 C．只要检测出受体细胞中含有目的基因，那么目的基因一定能成功表达 D．基因工程能使科学家打破物种界限，定向改造生物性状 【答案】　D 2．限制酶的作用实际上就是使DNA上某些化学键断开，一种能对GAATTC专一识别的限制酶，断开的化学键是(　　) A．G与A之间的键　　　 B．G与C之间的键 C．A与T之间的键 D．磷酸与脱氧核糖之间的键 【答案】　D 二、 “分子缝合针”——DNA连接酶 2.类型 来源 功能 相同点 特性 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键 1.DNA连接酶的作用 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 3.DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 返回 DNA聚合酶的作用 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 （2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 （3）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？ 可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的） 小试身手 载体的必要条件 载体的种类 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 ①细菌的质粒（常用） ②病毒